小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。$ J- Q# B) _4 o
2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。
/ g' s- x% b: v: K7 ~( P2 p3 c3 ^7 x3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min- s7 q! Y! J& y- B& G/ N
4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。7 F" K( T% z4 l3 K% L$ a, D
5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清
2 i- ~% F' d: T. V6 t4 j# l( a1 P6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。3 W1 f  Z4 O- p1 K! c
今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。1 ]! J1 g, n. t8 R) K! f  i, \6 E8 w
此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

angel-sakura

回复 18# kqyy
% f$ u$ U8 {+ y) ~- v8 [. R请问你是用多大的注射器？小鼠的骨头很小，我觉得1ml注射器能刚好冲骨髓，不知道大的注射器能不能冲？

angel-sakura

回复 15# 烂桃
8 Q! k3 W+ q3 \去除肌肉后再泡酒精，那酒精会不会进入到骨髓腔里面啊？那样不会对骨髓细胞造成损伤吗？此外，你分离的过程中有没有溶解红细胞这个步骤？

angel-sakura

回复 5# china1983chen # c- Y+ w" X/ Q. t
是漂浮的吧？你之前有没有溶解红细胞？我看有的文献上说要溶解红细胞，但不知道其他人是否有这样做过~

angel-sakura

回复 8# bypw " y0 s9 V2 W0 w
取肱骨是为了确保BMSC数量足够，毕竟是小鼠的~~没什么其他特别的原因，此外，我本来是准备直接穿刺冲的，但发现插不穿........所以就剪了，而且小鼠的骨头很细的，真不好弄，不知道你是怎么穿的？

angel-sakura

回复 17# jisuyun   g& d2 t' W, z/ L* S# ^- A
同求QQ号~~

angel-sakura

回复 4# tanhehe1006   h' a  {) u' o+ L5 ~, X+ t
请问你试过骨片培养法吗？这种培养方法怎么排除成骨细胞的污染？

angel-sakura

回复 28# tanhehe1006 ! P+ F# |7 o9 z; A/ P9 I
那你胶原酶消化的时间和浓度是多少？此外，你测了流失吗？

angel-sakura

回复 30# tanhehe1006 - t& u; x3 E$ Q( `
我本人没做过，但我学姐做的时候是选的CD44和CD45,还有一个不记得了，不过这些论坛上好像有，你搜搜看。你养的BMSC状态怎么样？我听我导师说骨片法的话BMSC可能状态不会长得很好，因为刚从体内分离出单一的BMSC，环境变化很大，且与其他细胞之间的相互作用突然消失了，推测BMSC可能会过早老化，或者影响到其分化的能力。不知道你们有没有考虑到这个niche的变化。