小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

本人原代操作步骤为：1、处死小鼠，75%酒精泡5~10min，并准备3个盛有培养基的皿。
+ U& C( c1 g& R; p% |& G0 m2、先初步分离小鼠的股骨、胫骨和肱骨，放入第一个皿中。6 H5 x* f3 s  g/ X  @: J4 f+ A- X, t5 W. W
3、仔细出去骨头上的肌肉和筋膜，放入第2个min
; T7 ]9 Z% Y( @. g4 K4、减去骨的2端，用1ml注射器吸取培养基吹出细胞，只到细胞泛白。" f; d7 R/ g- H' S
5、收集第三个皿中的细胞悬液，800g 5min，去上清# a# W! X0 y3 P# t3 Q
6、制备单细胞悬液，接种到一个皿中。; a4 m  J: \6 A, R8 M: ~
今晚刚做到这里，不知道明天结果如何，以上步骤如有不足的地方欢迎大家指出。; p1 e8 ^0 R2 J) C! d. Z0 |
此外，个人觉得仔细分离骨头上的肌肉时，将其放入75%的酒精中泡几秒会比较容易剥离，但至于是否会影响到里面的BMSC还不知道。

china1983chen

学习了，谢谢楼主

angel-sakura

欢迎大家来讨论~~本人也是第一次做原代培养~~

tanhehe1006

有可能有很多造血干细胞的污染的。小鼠骨髓MSC的培养其实和人与大鼠的还是有区别的1 F- O, X( s1 X4 E8 u) v6 o
你可以参考下面两个文章，都是来自Nature protocol的
; ~# G9 Z) O- e" P1 s# K! g

china1983chen

我昨天也是第一次做，可是出来的细胞都是圆圆的，不知道是什么细胞

china1983chen

回复 4# tanhehe1006 3 I7 U: M5 V& \2 b' G  y; _

* X0 i. x. g, }/ p7 }
$ {1 I, W* T; E) H! e; i' g5 ^    非常感谢，谢谢

tanhehe1006

附上我养出来的小鼠MSC图片吧

bypw

看了楼主的东西和步骤，我觉得大部分是一个常规的操作，但是有机电可能存在问题：1 U  Z5 y" ?# E* T" c
9 `; D" Z. {8 }7 ?' j. C* `3 k
1  取材上好像很少去肱骨吧，就是前肢，是不是这样效果很好啊
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8 U7 z+ T3 r5 \1 I7 ?6 u. g1 b2  减去两端，我觉得存在问题，因为干细胞主要存在干骺端，去掉后干细胞将会很少，建议直接穿刺冲。$ h! p- B' O8 \% t& \- d8 f
3  冲出后要轻轻吹打，让细胞混匀，注意轻
4 W2 ]0 E% ?& h; \$ l4  不要用酒精泡啊，

jisuyun

MSC是梭性的，你的图片多角形的应该是成纤维细胞哦

china1983chen

回复 7# tanhehe1006
4 W2 y' q: S1 `& B1 ]1 m! Y& H$ b0 ^! F4 Q& p6 |

% w2 a" o1 y( S( T0 g* \    这是原代细胞吗