小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

回复 15# 烂桃 ! J0 h/ q& q( J9 E3 `  O2 R. K
去除肌肉后再泡酒精，那酒精会不会进入到骨髓腔里面啊？那样不会对骨髓细胞造成损伤吗？此外，你分离的过程中有没有溶解红细胞这个步骤？

angel-sakura

回复 5# china1983chen
& b% H! V8 [* t+ B1 y( u是漂浮的吧？你之前有没有溶解红细胞？我看有的文献上说要溶解红细胞，但不知道其他人是否有这样做过~

angel-sakura

回复 8# bypw
) H) {: }+ y4 I5 p( @取肱骨是为了确保BMSC数量足够，毕竟是小鼠的~~没什么其他特别的原因，此外，我本来是准备直接穿刺冲的，但发现插不穿........所以就剪了，而且小鼠的骨头很细的，真不好弄，不知道你是怎么穿的？

angel-sakura

回复 17# jisuyun
0 F. B/ u- u' x+ _( k同求QQ号~~

烂桃

* X7 R5 \) O" ~2 B' S0 |5 Q

, N; a1 y4 L% I; P3 g' W回复 21# angel-sakura
0 a  b8 o5 z. b
9 Y) K- z. N! K( Z: b+ G0 |7 f. n+ e  N3 ^1 a% X0 U& P& V* m& ?! S
    我没有溶解红细胞，我感觉有一些血细胞可能有利于原代细胞后贴壁，三天后换去大半液，可以轻轻摇晃把沉积的血细胞大部分吸弃，再两三天全换液，这时如果血细胞沉积多的话可以用PBS洗一次。分离股骨时注意两段不要剪断，泡酒精没问题，注意冲出骨髓时要先把骨上的酒精晾干，如果直接连带肌肉泡的话，会泡不透，很容易污染

tanhehe1006

回复 17# jisuyun / x3 g/ P! f$ k* s- E( q
# p6 g$ `) u; L2 [) [; b5 z& b
% a4 C& _, d  Y0 X' Y# E
  119239794
5 _1 W; a/ w5 Y其实我是最近才专投养小鼠MSCs的，希望能相互切磋

angel-sakura

回复 4# tanhehe1006
4 C; M6 S7 v* Q% Y  G请问你试过骨片培养法吗？这种培养方法怎么排除成骨细胞的污染？

tanhehe1006

回复 27# angel-sakura 1 K+ v8 O* b) W3 k
+ w, \( n1 F- r& M) d) T1 ~* Y
3 |% U5 u& `& H/ X
    好问题，在多次传代中就消失了，况且骨片养的也提到p3-p8代研究么。重要的是在用胶原酶消化的那一步，骨片最好成一股粘絮状态，据我导师指点这样是MSC被消化下来和成骨细胞尚未很多被消化的临界状态。

angel-sakura

回复 28# tanhehe1006 + R: l' N. `& R% [$ _
那你胶原酶消化的时间和浓度是多少？此外，你测了流失吗？

tanhehe1006

回复 29# angel-sakura
% }) ~# r$ @4 f7 Y6 x# m
3 x1 _: U& e" o0 \$ g! Z# }3 A: e* i% |# u- `% O8 E
今天（昨天）我还做了。但是这回没有消化好，一般采取的浓度0.1%就可以了，时间我平常都是1.33-1.5个小时，我用的37℃摇床摇的。流式还没测，因为最近开始没多久，准备用消化的方法和多次传代的方法粗纯化后先反转录，流式正在预定中……那是必须做的，不知您做过流式没以及选用的标志物是什么？