小鼠BMSC原代培养经验交流贴~~

angel-sakura

回复 15# 烂桃
+ [& k# m$ b: b- O- g去除肌肉后再泡酒精，那酒精会不会进入到骨髓腔里面啊？那样不会对骨髓细胞造成损伤吗？此外，你分离的过程中有没有溶解红细胞这个步骤？

angel-sakura

回复 5# china1983chen
6 o0 I' z' ?* `- U$ T是漂浮的吧？你之前有没有溶解红细胞？我看有的文献上说要溶解红细胞，但不知道其他人是否有这样做过~

angel-sakura

回复 8# bypw # h3 p- U! L8 h( E/ P
取肱骨是为了确保BMSC数量足够，毕竟是小鼠的~~没什么其他特别的原因，此外，我本来是准备直接穿刺冲的，但发现插不穿........所以就剪了，而且小鼠的骨头很细的，真不好弄，不知道你是怎么穿的？

angel-sakura

回复 17# jisuyun 4 H  }" s" r4 W' k2 v  m
同求QQ号~~

烂桃

/ |- U5 @' P$ i  }: t! I" [  U* k* ~, U+ w. h, F7 |
回复 21# angel-sakura
" u+ r7 O8 G. p0 k* e, G3 b& X, _  R! G. e" @! B. l0 i* [# ^: G

% F4 l4 @1 W7 D/ u0 m4 O& |- Z    我没有溶解红细胞，我感觉有一些血细胞可能有利于原代细胞后贴壁，三天后换去大半液，可以轻轻摇晃把沉积的血细胞大部分吸弃，再两三天全换液，这时如果血细胞沉积多的话可以用PBS洗一次。分离股骨时注意两段不要剪断，泡酒精没问题，注意冲出骨髓时要先把骨上的酒精晾干，如果直接连带肌肉泡的话，会泡不透，很容易污染

tanhehe1006

回复 17# jisuyun " k- m+ z3 P  b9 i- D# g
# Q0 q1 g' F+ N- H$ N- B8 ?
' r* D) \! d( S; A, U# e
  119239794
1 o7 q( I* a  `8 L+ ]其实我是最近才专投养小鼠MSCs的，希望能相互切磋

angel-sakura

回复 4# tanhehe1006 ; h# m9 Q; E4 W) w( {1 G2 t. y
请问你试过骨片培养法吗？这种培养方法怎么排除成骨细胞的污染？

tanhehe1006

回复 27# angel-sakura & G4 H8 _' H: J. Z0 K; f' O
7 `  A* ~" C( f3 v/ H, v  k$ |

9 I# u& Q. c" S7 m! i( l# |    好问题，在多次传代中就消失了，况且骨片养的也提到p3-p8代研究么。重要的是在用胶原酶消化的那一步，骨片最好成一股粘絮状态，据我导师指点这样是MSC被消化下来和成骨细胞尚未很多被消化的临界状态。

angel-sakura

回复 28# tanhehe1006
. r8 q7 M  L% a7 D那你胶原酶消化的时间和浓度是多少？此外，你测了流失吗？

tanhehe1006

回复 29# angel-sakura
, _+ P  e3 @2 f: W5 Q' n# U  Y! g' b8 y1 {; u# Y, c6 _5 I
3 n5 ]- T8 ]  k+ R' s, I
今天（昨天）我还做了。但是这回没有消化好，一般采取的浓度0.1%就可以了，时间我平常都是1.33-1.5个小时，我用的37℃摇床摇的。流式还没测，因为最近开始没多久，准备用消化的方法和多次传代的方法粗纯化后先反转录，流式正在预定中……那是必须做的，不知您做过流式没以及选用的标志物是什么？