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本帖最后由 阿秀哥 于 2018-11-28 14:31 编辑 , r( a1 X# f+ T8 |; w
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处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!2 U+ {: t, z7 ^1 n
1).将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。$ N( B7 o8 h4 n% U/ K
2).继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。1 |! e7 T/ Y! w0 \* C
3).继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。
8 _5 H- h9 {' R3 S; k! q# G" Q4).重复步骤3再洗。
6 v6 a% M* k3 A$ ~5).重复步骤3再洗。* } p' e+ X6 I$ m1 ~7 G2 [
6).加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
: b. b* |, G3 f, g6 b, y W7).加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
8 B# _* R1 `1 h8).再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。
9 y; J+ d- f8 E: w3 G4 _9).加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。( i* e$ F" W( y6 @0 ^ r: ?
10).24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗.
. i4 j, x, v0 i1 C11).24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。5 r5 S! N6 W- y" [3 B: ~, Z
以上是对于细菌污染(常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌);若为霉菌或者真菌污染,加入两性霉素B清洗和培养,终浓度一般为2.5μg/ml(在30μg/ml时会有细胞毒性)。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。其它操作同。
# |3 U; \: e9 I& }# r! D希望对你有用。 |
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