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本帖最后由 阿秀哥 于 2018-11-28 14:31 编辑
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3 V8 l& d* @7 r/ f" ~处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!
1 b7 N/ Y, y8 ~7 w6 D1).将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。$ @( W: Q* J! F, W4 E& T- H
2).继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。: k1 E: Z+ d. b% {5 W0 d
3).继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。/ M$ V% J1 G- x2 i. b* L
4).重复步骤3再洗。+ @+ { ? ~9 J3 r, j+ U
5).重复步骤3再洗。
& m: s9 P1 k6 Z! C- g6).加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
! J: g* R7 e: ]% }# E2 r9 ~" G( x7).加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
) {' z" R, K' A% h* \' A8).再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。
, e' ]: G5 e9 i; y9).加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。
2 W# T- I% \, ]! m' F7 k10).24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗.
; G( |% q6 E6 O D% L3 f: Y, ^. F11).24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。2 l1 C; Z2 O% n6 }+ i$ l' ~( g
以上是对于细菌污染(常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌);若为霉菌或者真菌污染,加入两性霉素B清洗和培养,终浓度一般为2.5μg/ml(在30μg/ml时会有细胞毒性)。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。其它操作同。
/ l3 F: p( a$ R0 P希望对你有用。 |
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