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本帖最后由 阿秀哥 于 2018-11-28 14:31 编辑
4 ^! F! ~, ~: \9 i. y1 s6 M
: k5 S& K4 o1 V( n处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!
8 y3 l1 D ^ X# X5 P% e4 J1).将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。
( s3 t" O" W) T4 e2).继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。# X+ c0 ?. l ^- L7 ]
3).继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。8 i& W! I0 L, }& Q# ^: o1 V
4).重复步骤3再洗。
/ I% i7 @2 ~5 O; o) V: _& n5).重复步骤3再洗。$ v/ t) g8 B! @2 O
6).加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
1 S% X4 P+ t/ T, _3 h- M7).加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。4 C }4 N3 \- ~5 Y2 y' G
8).再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。
8 Q* j W! t! p+ u2 m+ t9).加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。' F' }% w: v1 ]* H8 } q$ g
10).24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗. _" J8 w+ @ y; l2 P
11).24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。, a) o( J ]; {6 D- M v5 r
以上是对于细菌污染(常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌);若为霉菌或者真菌污染,加入两性霉素B清洗和培养,终浓度一般为2.5μg/ml(在30μg/ml时会有细胞毒性)。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。其它操作同。( q( ^. V# ~, L$ t, t+ j- n H
希望对你有用。 |
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