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本帖最后由 阿秀哥 于 2018-11-28 14:31 编辑
( h6 H2 \& h5 }5 j: E7 |6 a& l! |* d& J8 c
处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!
0 V5 @% L# ?8 h0 x. G1).将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。! r$ b& g6 {" i; j* A0 w
2).继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。
" W4 @: g; b; a7 b" z z& X3 E3).继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。
" d5 P% Q9 W4 l8 r, u3 l! _2 e4).重复步骤3再洗。
) {6 G- u7 U( c& N5).重复步骤3再洗。+ W/ v- W" w* K* F" u( b
6).加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
! z. q) h/ Y8 Q+ g4 _" n7 h7).加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。( h# T2 v6 Z6 h$ @& s
8).再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。
! q$ y0 [ e4 _* J" c0 Y9).加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。7 ?) N+ n- Y; V* l
10).24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗., ~* a7 @+ L) g7 I/ T2 F x: R
11).24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。% F. z5 T& K# s- w
以上是对于细菌污染(常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌);若为霉菌或者真菌污染,加入两性霉素B清洗和培养,终浓度一般为2.5μg/ml(在30μg/ml时会有细胞毒性)。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。其它操作同。
* U* B0 v) g/ u/ A3 Y3 x; T3 w# R希望对你有用。 |
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