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本帖最后由 阿秀哥 于 2018-11-28 14:31 编辑
* a _. N6 V5 k5 f- O+ I* j/ a+ v) l2 ]; S1 J/ O
处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!
! U k( w! ~3 r6 F1).将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。
- j) q" }9 U2 a) e2).继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。
4 G0 F% [ r$ y8 c6 R; e& c3).继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。
. j! U: M4 H" X0 j: ^* b, f# t4).重复步骤3再洗。" _( v5 E6 ~% w/ ~; S
5).重复步骤3再洗。* J# e, }! }' X* M! K& y% x
6).加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。) S, n: I$ o; j. j9 H
7).加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。
) n3 A7 Z6 P, L( A$ x R/ z" m, F, |8).再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。
2 B1 K" X0 X- C. `0 c' i4 h9).加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。
7 z% E% @- B5 b4 l& ~/ h. p10).24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗.) F( F$ z* K3 ]& ?- |: ?
11).24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。
5 Y m, ~3 i) ^$ M 以上是对于细菌污染(常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌);若为霉菌或者真菌污染,加入两性霉素B清洗和培养,终浓度一般为2.5μg/ml(在30μg/ml时会有细胞毒性)。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。其它操作同。
K% O( N7 d8 i* E希望对你有用。 |
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