求教有关大鼠BMSC原代分离方法选择

illidancui

小弟刚开始接触大鼠BMSC，由于没有师兄师姐带，所以只得自己试着做。
7 E! _! F* e) ~( u% U5 B一般用的分离法有离心和全骨髓法，求教一下具体选择哪个好点，因为我好像在哪里看到有人说过要是做细胞用于MARK研究的用离心比较好，要是做诱导的全骨髓发就行了。+ y, W9 ?7 ^3 E7 A( P
小弟要转基因来诱导分化的（做过一次全骨髓的，比较失败），还望高手指点一二。

bingo

重大的师弟？呵呵~感觉像~* B) I# u8 v" L
其实就像我跟你说啦，percoll法分离的细胞较纯。全骨髓长的较快。不过最近我们的白膜层不是很明显，不晓得是不是离心机的原因~

科学家

回复 1# illidancui
: x9 B- D: P" }( ~6 W  o
* }0 {# z/ e& a6 z* P
5 j( f, J- O/ h% ]# L* R* F( f2 X9 c    全骨髓培养细胞数量比较多，受到的损伤也比较少，分化效果比较好，离心对细胞有损害而且也比较麻烦

碧海蓝天

我们用的全骨髓贴壁法，分离简单，细胞增殖快，生长状态好，传代后纯度也可以，你可以试试，至于你说的全骨髓失败是什么意思，怎么会失败呢

xxzhang83

我就用全骨髓，细胞传到第2代就比较纯了，长得很快。
, y5 N/ J; V; w, o$ m0 B( R5 _1 P0 _/ S我用来诱导成骨，分化也可以啊~~~

mahong_ok

还是全骨髓法好，数量多，细胞质量好，只是血细胞多，不过换几回液或传一下代就没了。

illidancui

回复 4# 碧海蓝天 2 d& v9 Y9 `3 Z4 r' P9 c

% G/ I0 X# M/ S: |7 W8 [. d% x) G' d# |: o: ]& E. z: [
    个人感觉可能24h第一次换液PBS吹细胞了，掉了很多，密度变得好低。后来细胞奇怪地就成团了，聚在一起，而且感觉长的奇丑无比。

illidancui

回复 2# bingo 7 [/ h" l3 C7 s2 {/ g; n* [- Q  m8 ~, w
/ P, v" y8 H+ r3 |( d6 r! }1 L( c4 ?
$ x1 G0 z( C% i! g& N; `( p
    2楼师姐，你是我偶像，你这也太犀利了吧。呵呵。确实感觉percoll离心有点麻烦，下次都做一下对比下看看再听听大家的意见取舍一下。