急求脐带贴壁法分离培养步骤

5784630

在之家论坛上已经看到关于脐带贴壁法分离培养步骤，但是过于笼统，我还有一些细节不甚明白，请哪位高人解答一下详细步骤，比方说组织进行贴壁后，什么时候才可以将组织残渣移去？怎样传代？

deshenglll

血腥味吧

马锡慧

回复 8# realinter 9 U0 i* f: _3 ^" K( m7 P
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! J4 f( o: B9 E  w
    2厘米？？？？？？？不会吧，是不是2毫米啊？

realinter

要有耐心哈，一般12天以后才有细胞爬出的，呵呵

mbpsky

回复 9# hawkyiger
; @( d4 @, M8 x7 M9 E我们不用剪刀，那样会损失大量目的细胞....用刀片削....用的是锋利度不是剪切力....而且我们一般不用胶原酶...我们用的是细胞刮处理传代....

xiegm

请问Robert－A，2CM剥离血管后是否剥离外膜呢？切成多大的体积（有人说1mm 有人说0.5 cm）？切时用剪刀和手术刀片有区别吗？多长的脐带铺到75培养瓶呢？是否需要先让它贴壁1小时再加入培养基？

Robert-A

注意血管的剥离，要剪成2厘米小段进行剥离胶体，这样可以一对一的培养在75底面积培养瓶内，培养液体积在20ml，轻轻的摆动，使组织块均匀分布于瓶底，旋松瓶盖。

icesnow

回复 8# realinter
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; A1 c8 v# e. |8 m( t4 b1 m# H" F% w" Y( |9 `7 G
    谢谢，前几天又取了一次，考虑贴壁时胶太多，就用胰酶消化加离心，想去除一下，但是现在看胶还是很多，影响贴壁，组织块贴不到瓶壁上，自己就滑开了

realinter

回复 6# 5784630 ) J  v  t$ f6 P0 p* Q$ I0 v: X" l

6 _7 K. v+ `: t( q  z没有臭味，应该注意细胞培养间的卫生，培养箱的清洁和灭菌。
" c+ x4 e( T% p9 M另外就是脐带最好是抛腹产的，如果是顺产的可以先用碘伏和酒精各浸泡30s，在用生理盐水洗净，再分离。

hawkyiger

回复 7# icesnow
# i: `. `. Y2 y1 x( U% K) E+ D6 \. ~7 U% O  F
应该都是剪刀剪碎的话，那就尽量越小越好，虽然是个很麻烦的步骤，但还是很关键的。至于到多细凭感觉就可以了，一般在1mm左右（理论上）。但最好不要含太多水分，不然不好剪。铺的时候用一个刮刀用心的分一下，把堆在一起的分开。你不用指望所有的组织块都均匀大小，均匀铺开，只要有一部分较小的不连在一起的组织块铺开就可以了。小心处理，只要有一些组织块能够分理出细胞克隆就算成功了。