急求脐带贴壁法分离培养步骤

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在之家论坛上已经看到关于脐带贴壁法分离培养步骤，但是过于笼统，我还有一些细节不甚明白，请哪位高人解答一下详细步骤，比方说组织进行贴壁后，什么时候才可以将组织残渣移去？怎样传代？

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在贴壁细胞占大多数情况下，因细胞贴壁很牢，可以用缓冲液洗（必要的话轻轻吹打），传代和成纤维细胞传代基本一样
+ R8 a6 g+ i- c祝你好运

icesnow

我也一直有这样的疑问，有没有高手曾经用这个方法取过原代？/ W- k; ?+ Z0 C% \
我曾试过一次，发现华通胶太多，不用胶原酶的话贴壁很困难，也试过多次离心去除胶质，但效果不甚明显，望高手能给点建议，谢谢

hawkyiger

分离出来的细胞数量足够多时可以将残留的组织块出去

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谢谢楼上，请问你是否也出现了脐带培养出现的臭味？

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回复 4# hawkyiger
' [* K8 R4 c- l/ Q" f! a$ Y- E) [  U" W) x

4 J+ x7 }: A1 s: v1 p# O- l( T    楼上，您好，请问你是否也出现了脐带散发出来的恶臭？

icesnow

回复 4# hawkyiger ) d& ]$ e, E% _+ j! B

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    我曾试过一次，发现华通胶太多，不用胶原酶的话贴壁很困难，也试过多次离心去除胶质，但效果不甚明显，还有组织块大约多大合适，望高手能给点建议，谢谢

realinter

回复 7# icesnow
" }  |5 ~5 C7 {  y) z 每瓶种的胶体不应该太多，以适度分散为最好，没有用过胶原酶，直接贴壁爬出的，效果很好。组织块大约2CM左右。

hawkyiger

回复 7# icesnow ! }$ I2 {; U- |
, K# A0 M, F& L4 y2 S% H
应该都是剪刀剪碎的话，那就尽量越小越好，虽然是个很麻烦的步骤，但还是很关键的。至于到多细凭感觉就可以了，一般在1mm左右（理论上）。但最好不要含太多水分，不然不好剪。铺的时候用一个刮刀用心的分一下，把堆在一起的分开。你不用指望所有的组织块都均匀大小，均匀铺开，只要有一部分较小的不连在一起的组织块铺开就可以了。小心处理，只要有一些组织块能够分理出细胞克隆就算成功了。

realinter

回复 6# 5784630
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没有臭味，应该注意细胞培养间的卫生，培养箱的清洁和灭菌。
2 Y) x$ ~- y' s6 l5 P* V; z另外就是脐带最好是抛腹产的，如果是顺产的可以先用碘伏和酒精各浸泡30s，在用生理盐水洗净，再分离。