原代小鼠BMSC第5天了~~请教~

angel-sakura

' ~1 y3 c7 \3 v0 T* d0 A9 ^: F; ^# `( U* q# D
从分离代现在已经有5天了，细胞基本长满，如下图：, ^) C/ @. c# Z2 d4 Y& V# X( j- N
+ t: ]; N2 j* G
10倍
2 t" S7 v; d9 i( q/ q* A! v5 c1 \/ n
3 F! Y/ H( M5 X
这个是20倍的) n; E, p6 V2 T1 m2 h: z* z

- m# w+ t; H; S0 K& B+ Q, G# n* ?3 k0 e
* w% k) r% g6 |. [我听有人说分离后放一周不去管它，但现在5天就长满了，是不是可以传了？还是得继续等？
# z' u& g" B+ `1 `5 D( p5 h此外，我也已经传了~~但消化了5~6min，结果还有50%的细胞仍贴着。。我用的是0.25%的胰蛋白酶，无EDTA，是否消化时要加EDTA？消化时间大概是多少？
9 V1 ~! F3 \0 V0 W再者，从20倍来看，细胞有一些是呈纺锤状的，其他的确是呈宽扁的圆形，请问可能是哪种杂细胞（消化时也是最先消化下来的）/ L& Y1 {3 _$ j  g" C0 T
谢谢~~~

xxzhang83

传代吧，BMSC细胞汇合70%到80%就可以传了。
" \1 P7 _1 @  N! X! J$ H长满的话，细胞出现接触抑制，会停止分裂而容易分化。
; A! S7 `% @& F1 t, F看上去有些像内皮祖细胞啊~~~~
: T& J; R: n1 H: M" }2 {传代吧，第3代的时候再看一下，应该比现在纯度高~~~~

angel-sakura

回复 2# xxzhang83
' q/ e0 v7 A" t3 a7 h, ]6 x内皮祖细胞？？有没有相关的照片？谢谢

5784630

照图片看，你的细胞生长状况相当不错，我们一般说的一周不动，是在细胞状况一般的情况下的经验，但是如果发现细胞状态很好的话，尤其是你这样细胞已经达到一定的数目，细胞形态也相对正常的话，可以提前传代，因为细胞过密也会对干细胞的生长存在抑制作用。$ n* J! \0 T" c2 R
   另外，细胞过密也会对干细胞的分化潜能有不利影响。

zhaolili0324

我也觉得里面似乎内皮细胞不少

hamigua95

大鼠的MSC，最多消化1min。
# w% ]/ ^7 N0 S请问内皮祖细胞什么样子啊。可否发图看看

kqyy

add edta

duanduan48

MSC的消化时间是很短的，那些不能消化下来的可能是内皮细胞、单核巨噬细胞、脂肪细胞等。2 ~9 W' P/ H( o6 m# ]
不少文献中提到MSC传到10多代还是会有圆形细胞，即使通过CD11b negative selection 的方法培养，也还是会观察到圆形细胞。. \! l$ O5 A7 r2 }7 r
小鼠MSC有很明显的异质性，只要能通过诱导及表型鉴定符合一般的文献报道即可。

china1983chen

BMSC细胞不用消化这么长时间的，可以通过消化纯化一下细胞，超过一分钟 消化不下来的就不要了

圣牛

从图片看，细胞培养的挺好的，应该可以传代了，时间久了易发生接触抑制。胰酶消化时间一般控制在一分钟左右就差不多了。