原代小鼠BMSC第5天了~~请教~

angel-sakura

: y" m" E. `, U" G* P) _

9 u7 p6 f$ Z  E- U% t+ w从分离代现在已经有5天了，细胞基本长满，如下图：
3 S' D. E3 P& Z6 z9 Z7 {4 Z7 U, o2 M( t( n
10倍
# Q7 t, F8 b7 G, u0 Y2 g
: f$ c0 U! `9 y1 |- _% J, e) |2 _3 o9 s' \  k( o
这个是20倍的
  s! Q* ?9 _1 _8 D0 ^7 Z+ Y% y5 y; u
2 G% E! x6 O; b! B
我听有人说分离后放一周不去管它，但现在5天就长满了，是不是可以传了？还是得继续等？6 {7 `% v8 |9 z
此外，我也已经传了~~但消化了5~6min，结果还有50%的细胞仍贴着。。我用的是0.25%的胰蛋白酶，无EDTA，是否消化时要加EDTA？消化时间大概是多少？
( @+ Q4 u9 B  V6 [再者，从20倍来看，细胞有一些是呈纺锤状的，其他的确是呈宽扁的圆形，请问可能是哪种杂细胞（消化时也是最先消化下来的）" @' ?* v3 o, O% v! P- F2 v$ G
谢谢~~~

xxzhang83

传代吧，BMSC细胞汇合70%到80%就可以传了。( K/ q( Q; u/ E% }7 G, r
长满的话，细胞出现接触抑制，会停止分裂而容易分化。
; _$ F2 C) P. ~' l看上去有些像内皮祖细胞啊~~~~
4 F# e6 @; @% r5 E, T0 @传代吧，第3代的时候再看一下，应该比现在纯度高~~~~

angel-sakura

回复 2# xxzhang83
; B4 N# c+ f7 q+ m7 R7 r内皮祖细胞？？有没有相关的照片？谢谢

5784630

照图片看，你的细胞生长状况相当不错，我们一般说的一周不动，是在细胞状况一般的情况下的经验，但是如果发现细胞状态很好的话，尤其是你这样细胞已经达到一定的数目，细胞形态也相对正常的话，可以提前传代，因为细胞过密也会对干细胞的生长存在抑制作用。
) E+ p+ M5 t9 x$ J   另外，细胞过密也会对干细胞的分化潜能有不利影响。

zhaolili0324

我也觉得里面似乎内皮细胞不少

hamigua95

大鼠的MSC，最多消化1min。
/ l& l) A9 i5 ^1 y2 o请问内皮祖细胞什么样子啊。可否发图看看

kqyy

add edta

duanduan48

MSC的消化时间是很短的，那些不能消化下来的可能是内皮细胞、单核巨噬细胞、脂肪细胞等。
5 m" ~7 t9 I9 m* v" l9 ^不少文献中提到MSC传到10多代还是会有圆形细胞，即使通过CD11b negative selection 的方法培养，也还是会观察到圆形细胞。
: D% w. O( y0 g8 M小鼠MSC有很明显的异质性，只要能通过诱导及表型鉴定符合一般的文献报道即可。

china1983chen

BMSC细胞不用消化这么长时间的，可以通过消化纯化一下细胞，超过一分钟 消化不下来的就不要了

圣牛

从图片看，细胞培养的挺好的，应该可以传代了，时间久了易发生接触抑制。胰酶消化时间一般控制在一分钟左右就差不多了。