今天养MEF过程中发现的问题，请教大家

cony

今天我要复苏ES细胞，对MEF进行丝裂酶的处理。处理前六孔板上MEF还是铺得80-90%汇合的，但是三个小时的丝裂酶处理后，发现MEF饲养层变了，如何变请看图，图一为处理前，图二为处理后，红色区域为无MEF区域。。。% H0 [  n9 h% R7 M; t

cony

谢谢大家。首先MEF出现这种情况现在觉得是细胞状态不好，加上没有铺明胶易在MMC处理时发生收缩脱落。现在养ES有了很大的进步，一是feeder先MMC处理后冻存，二是复苏ESC的前一天才复苏MEF，且明胶包被30分钟，当前处理当天接种确实不太好，三是ESC最好隔天传代，每天换液，现在ESC长得还满意。
$ E$ i/ y* H2 x/ O5 N8 m/ ^大家互相交流学习

iseeyou1210

feeder should be prepared in batch and frozen down.( w0 ]# R: ?  A9 r( z" q0 n! A
in this way, you can control the quality.
4 Y3 X% m4 R5 @( Eif you do the feeder everything before the thawing the ES cells, I am not sure you can keep the consistency of your experiment.

iseeyou1210

你们都是在复苏细胞的当天做用mmc处理MEF呀?

supergama

从示意图看，细胞状态不会太好所以丝裂霉素处理后会有细胞死亡，且因为细胞状态不好，处理后铺好的饲养层容易卷边，明胶包板会好一点，但用这样状态的MEF养ES不好！

fespysok

我觉得MEF状态不好，部分细胞发生凋亡，粘附力下降了

是鸟就要去飞

看来上面有的人好像没明白楼主的意思，楼主上个实图大家就明白了，也好分析

afei198520

回复 11# cony , }4 P( v  [: i$ e1 S! t: q) I8 z

; B8 j0 ]3 F7 p9 }  k  Z3 W% Q8 S呵呵 MEF长的很快的
6 r8 i- s( j% h" H. C是不是加液的时候蹭掉的呢？

cony

奇怪，过了一天，它又长汇合了。。郁闷。

zsc78

个人觉得可能是MEF的状态不好，细胞密度比较高，被枪头刮到的地方容易脱落。不一定对哈。