今天养MEF过程中发现的问题，请教大家

cony

今天我要复苏ES细胞，对MEF进行丝裂酶的处理。处理前六孔板上MEF还是铺得80-90%汇合的，但是三个小时的丝裂酶处理后，发现MEF饲养层变了，如何变请看图，图一为处理前，图二为处理后，红色区域为无MEF区域。。。% F! k# V) W6 o7 W# E

cony

向大家汇报，用的是10ul/ml丝酶，而且绝对不是换液时吹走了。暂时没有光盘复制下来，不好意思

cony

还有，今天又碰到了一种情况，我用的是六孔板养的，发现MEF从孔边缘往回缩，有的缩成一个乳白色不明物体，应该是MEF组成的，本来是长得很密的，结果缩了以后就基本上变没了，郁闷。。。也是第一次碰到这种情况。大家有没法啊？就算MEF长得好，我复苏的干细胞也长不起来，太背啦，大家指导一下啊。。

cony

奇怪，过了一天，它又长汇合了。。郁闷。

cony

谢谢大家。首先MEF出现这种情况现在觉得是细胞状态不好，加上没有铺明胶易在MMC处理时发生收缩脱落。现在养ES有了很大的进步，一是feeder先MMC处理后冻存，二是复苏ESC的前一天才复苏MEF，且明胶包被30分钟，当前处理当天接种确实不太好，三是ESC最好隔天传代，每天换液，现在ESC长得还满意。
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