LIF应该如何稀释呢？10-7次方的

上海过客

LIF应该如何稀释呢？10-7次方的
+ U% b: \+ C- Z* t
- D5 A2 p% W$ A3 T" h' ^2 L2 o+ ]' g买了够配10升培养基的LIF应该如何稀释呢？. F  W# ?! ]6 ]( Z# z9 |1 w

9 K( z9 r1 ^. N$ n. Y! {) G+ P) @7 P想把它小量分装了 。  250ML 或者 500ML的 量 。- y' g# S) y7 G5 g, u5 }
9 N, k$ ?% ~" z* X' P: m0 y
1ML 的母液用着感觉 不好  ，浓度降一点 ，分装一下 。
3 Y1 l2 B8 {3 L, r* u1 g4 s3 f7 D% Q5 F1 N, H6 V. E
做过的 ，请不吝赐教

friendly0722

用1%BSA/PBS稀释到10-6，每次用的时候1000倍稀释，分装的时候就看你平时配液的用量，要是配100ml就分装100ul。

tianangelt

回复 7# 上海过客
/ L4 k' f" j' ~5 ~% O# T% M9 w1 N5 ^0 n, c7 o9 b4 U* S- I! ?: m
$ b6 O) Y8 B0 Y( U
    我们是构建的重组LIF质粒，您是用LIF维持干细胞未分化状态吗？主要做哪方面呢？

qgjin

回复  qgjin - w5 U6 D- R2 V4 @( A1 }1 W

! h0 G- k5 O7 [2 r! {) q2 l$ y此人回答极为详细。不过我们这边现在都用自己做的LIF。用于ips诱导是没问题的。, n- p, ~( V5 h9 _; B7 b/ l* O- r0 s
Jonathan 发表于 2010-5-6 12:41

+ @8 }- |5 ]1 J, }7 E
) t/ ?6 b& _; \1 U2 f$ W' Y; j" F% D) F- q6 b; T
请问能不能讲解一下自己制作LIF的方法吗

qgjin

谢谢 ，你考虑的很周到了 。  
% N1 l$ s  E0 m6 x& l1 G( ?7 @ 1是分装     我想用DMEM也是可以的 ，1ML 10-7次的 加9ML DMEM  后0 i9 \7 s: u& M/ i
  ...
! J, K3 ?/ S: b上海过客 发表于 2010-5-6 13:15

- @+ _5 z8 d1 P1 H" M; ?

) g+ |# Z! n8 _
3 \, f/ f( v' E8 V0 v原液瓶够大， 这样当然最好了

上海过客

1ml稀释成10L？   你先看看标签， 是不是有PBS稀释的；要是是 请如下操作；' I- c" f& n& w' @- D- J
1：取 1ml ILF 移到15ml 灭菌的 ...
6 N* A3 e1 ^4 |qgjin 发表于 2010-5-5 16:10

  G' f3 b) l: B2 j& R
3 @8 P5 y- [& u7 N$ `' ~
谢谢 ，你考虑的很周到了 。  ; G; w. U7 e# S. K* w
1是分装     我想用DMEM也是可以的 ，1ML 10-7次的 加9ML DMEM  后* y5 n: c6 a+ s2 y' _; _
                                      0.5ML分装为20管，每管可以配置500ML  培 养基，或者分两次各配250ML培养基: b, Y2 }  t- B5 i5 M2 P* Q& Y3 u

; h0 ~+ F! F8 w# H; T: t4 Y7 u" s 2 需要离心 。  这个的确是需要做的 ，10-7 次的 LIF 损失一点，量都很大啊。

上海过客

自己怎么做 啊

Jonathan

回复 9# qgjin
/ ^% Y* {* ]; m" W# J; ?- J* m2 l! s* M* S
此人回答极为详细。不过我们这边现在都用自己做的LIF。用于ips诱导是没问题的。

qgjin

对了，使用时，可以用小型离心机离心一下，使贴在盖上的液滴滑入1.5ml离心管底部！！切记！！！

qgjin

( G9 O1 A1 x9 ^- y6 \
. P( B, T! L: G% T  D* ~
1ml稀释成10L？   你先看看标签， 是不是有PBS稀释的；要是是 请如下操作；- X9 H6 z) H$ y) I- B! @
1：取 1ml LIF 移到15ml 灭菌的tube5 J4 R8 A% s4 h) h, x) [
2：用 1ml  PBS （0.22um过滤的）冲洗LIF 小瓶（小心不要把PBS洒出来）；3 M" E3 g3 q+ R' N
3：将冲洗的PBS 移到15ml 灭菌的tube；1 S) ]( C- P. X# T  e7 S
4：将步骤2-3 重复3次；. [0 {& z, k3 {$ ^" N% f) n% V' L" z: ^
5：将15ml 灭菌的tube定溶到10ml，封口并混均；（直接添加6mlPBS有可能不够）5 ~+ q2 S" _7 D$ r: q
此操作中，15ml 灭菌的tube最好是 10ml定溶瓶。
3 U# y4 B9 e5 m7 f7 V6：将0.5ml LIF 稀释液 装入1.5ml离心管（灭菌）；7 _$ p: J5 k" s' _
7：用parafilm 封口，标签，保存（原保存温度）。' t$ @. q; D: M1 Y  E2 l
每配制500ml培养液时 添加一管（稀释的0.5ml LIF）。# Y; k$ B3 D9 A& N
此方法一般适用于配制培养液，或大容量的（100-1000ml）稀释。
# k+ X3 C, X0 d- |3 w/ `6 s方法二$ }/ D- y7 J) Q9 p) C
1：取450ul PBS 移到1.5ml离心管（灭菌）；
& O3 u. D$ L! |$ \, M( G  w2：取50ul LIF原液 移入到装有450ul PBS 的1.5ml离心管（灭菌）；# o0 R# l( I. g5 e! x2 p
3：封口，摇均，标签， 保存。& d* m* k) I7 t2 r3 {
此方法适用
0 `# s9 O9 [( d注意：必须封口，贴标签；操作要在洁净工作台。. x% d' j' [9 a  H" A- _) y
原理: 1ml（20*50ul） 可配 10L（20*500ml）培养液， 因此50ul原液可配置500ml培养液 。