LIF应该如何稀释呢？10-7次方的

上海过客

LIF应该如何稀释呢？10-7次方的5 `# @1 @1 [* v7 E8 [9 v" w

! y0 n2 `2 Y$ G* e* Q: `7 q买了够配10升培养基的LIF应该如何稀释呢？1 m. l0 W/ f& X) F& {1 N4 E
, e- r0 N, b6 s7 i) s( y7 o, c
想把它小量分装了 。  250ML 或者 500ML的 量 。" v! b! ~9 ?0 c' X) X

8 Z5 A# O5 O" n- y  |/ y1ML 的母液用着感觉 不好  ，浓度降一点 ，分装一下 。+ c) H: Y/ e% p& o$ P1 X, \( F

9 b9 P7 N5 P9 ~% D' q( w! |: g6 V& M做过的 ，请不吝赐教

friendly0722

用1%BSA/PBS稀释到10-6，每次用的时候1000倍稀释，分装的时候就看你平时配液的用量，要是配100ml就分装100ul。

tianangelt

回复 7# 上海过客
) ~  V' O% ~: N8 P, s; o1 K8 T9 F6 D( I$ G) \2 F

; l. ?! D9 f, t1 _# {, K    我们是构建的重组LIF质粒，您是用LIF维持干细胞未分化状态吗？主要做哪方面呢？

qgjin

回复  qgjin * a/ e- o" h0 G

- x! a5 v$ o3 g, [* M, n此人回答极为详细。不过我们这边现在都用自己做的LIF。用于ips诱导是没问题的。' b! G+ N' v  d9 e$ k8 Z
Jonathan 发表于 2010-5-6 12:41

: G/ H! v0 H9 h( I- e2 V! a5 o
9 @6 N! y7 U9 _& q( e) u" h
* U5 n( A# ?8 q" q; B: j9 M
请问能不能讲解一下自己制作LIF的方法吗

qgjin

谢谢 ，你考虑的很周到了 。  
7 z  ~8 D* y# y 1是分装     我想用DMEM也是可以的 ，1ML 10-7次的 加9ML DMEM  后
6 e7 @2 f( }; s  ...2 P$ I% ~9 L3 `8 F  s; ?
上海过客 发表于 2010-5-6 13:15

8 k5 O) V$ Z& [! C3 m, N, ]! @+ v2 i% P0 |7 o3 D- g

; z, `8 n' s0 m原液瓶够大， 这样当然最好了

上海过客

1ml稀释成10L？   你先看看标签， 是不是有PBS稀释的；要是是 请如下操作；9 H/ T! F/ L( d+ H$ K! W. f& W$ |( Z
1：取 1ml ILF 移到15ml 灭菌的 ...
6 I$ b/ ]( b' z: F& ?; Y8 X: T6 vqgjin 发表于 2010-5-5 16:10

; B% G. P$ L* x/ T& G( N
% |* G+ T( G& U/ g( u$ |* N
谢谢 ，你考虑的很周到了 。  / w: J3 Z' e0 {' o/ i3 {
1是分装     我想用DMEM也是可以的 ，1ML 10-7次的 加9ML DMEM  后3 j9 C( v0 n4 o+ x2 P# ]8 `
                                      0.5ML分装为20管，每管可以配置500ML  培 养基，或者分两次各配250ML培养基- u/ I9 D# ?# j" [
+ k' \+ p9 b: V+ G, X1 {
2 需要离心 。  这个的确是需要做的 ，10-7 次的 LIF 损失一点，量都很大啊。

上海过客

自己怎么做 啊

Jonathan

回复 9# qgjin
1 N* V/ u* s; V% ]) g( _/ l: Q6 i* N& }4 o. a: H+ X. G
此人回答极为详细。不过我们这边现在都用自己做的LIF。用于ips诱导是没问题的。

qgjin

对了，使用时，可以用小型离心机离心一下，使贴在盖上的液滴滑入1.5ml离心管底部！！切记！！！

qgjin

+ r8 D  S- k+ C  O' K1 D+ ?! n) O+ W( B( {/ G) t* ]5 e
1ml稀释成10L？   你先看看标签， 是不是有PBS稀释的；要是是 请如下操作；2 @$ C, }5 Y$ m) |
1：取 1ml LIF 移到15ml 灭菌的tube
$ b5 v; v, d) ^% o6 C2：用 1ml  PBS （0.22um过滤的）冲洗LIF 小瓶（小心不要把PBS洒出来）；
+ p1 A% G, V, f0 E3：将冲洗的PBS 移到15ml 灭菌的tube；
; [& z- U5 Y, d2 b) K' ^4：将步骤2-3 重复3次；
" q3 R4 Y8 T  M5：将15ml 灭菌的tube定溶到10ml，封口并混均；（直接添加6mlPBS有可能不够）
3 ~* f! J7 Y: f5 g) v此操作中，15ml 灭菌的tube最好是 10ml定溶瓶。# l3 ]( L0 g* o: a5 b9 i8 ~
6：将0.5ml LIF 稀释液 装入1.5ml离心管（灭菌）；1 `# _0 x8 ~! @& s. k
7：用parafilm 封口，标签，保存（原保存温度）。9 [- s. B* b6 k& E- }
每配制500ml培养液时 添加一管（稀释的0.5ml LIF）。
; W* s( e5 J6 Z% D3 t" a此方法一般适用于配制培养液，或大容量的（100-1000ml）稀释。
7 s6 M3 q2 h2 V! \9 D  N  g# F8 {5 X+ m方法二
! I! W+ V% z  y1：取450ul PBS 移到1.5ml离心管（灭菌）；
" P6 y4 ]2 k# c% q1 x# e2：取50ul LIF原液 移入到装有450ul PBS 的1.5ml离心管（灭菌）；
  Q2 S6 U9 }7 }$ L+ D3：封口，摇均，标签， 保存。
- R5 p# K- E: }% G此方法适用% F7 \& w/ U& H$ j% ]7 \/ }
注意：必须封口，贴标签；操作要在洁净工作台。  @  S/ F% B: b7 I
原理: 1ml（20*50ul） 可配 10L（20*500ml）培养液， 因此50ul原液可配置500ml培养液 。