肌源性干细胞 组织消化 几种酶的 量化 比例！请高手指教！

学习快乐

现在本人 正在 提取分离 肌源性干细胞，但几次都是因为消化过度，第二天细胞死亡，以失败告终。
( B- `5 W8 e2 G1 H* X2 d) I请高手指教，胶原酶 dispase 和 胰酶的 具体 建议 毫升数 和比例。

tanhehe1006

胶原酶0.1%就凑效了$ C( w; a- x& w& J) B
dispase我用的是二型，只要总单位数在2.4U/ml就可以了
, o3 D. M9 n- w$ s# p% ?以上两个酶有混加的也有分开的，终浓度掌握好。液体和组织块的比例一般在5-1：1都是有效的
7 D4 m0 U; c  H" N. g5 P+ Z7 f最后胰酶的消化建议还是轻一些，1：4就好，用PBS稀释

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多谢。

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做了 几次，细胞经常污染。% j& W* ?" B6 L6 z& V
最后一次 细胞已经长到 pp5了，又污染了。
) T/ J- c2 O! e1 N实验室条件是差。; r" i; \, d3 A& p7 U0 K& x
但感觉是不是 操作 还是 培养基有问题呢？, a- S! E; {3 `) K9 {* W& C6 I
把培养基 放在培养瓶里面 放培养箱 没有发现污染。
  Y( o. j) s; w" }& t; ?+ |5 S各位高手 能不能 给点 你们 成功的 详细 步骤 指导指导啊。

hyde

可能是环境，试剂问题，要相信自己的操作，我在国外交流养myoblast，就照着他们的protocol做的，不太会污染，过程基本类似

lxp10405

终于看到外文版的具体细胞培养步骤了。多谢！

无知后辈

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6 Q, u, A) R, F* K$ o3 _- _& \7 j+ [/ t6 `# r  m
请问我使用I型胶原酶（0.1%）加上胰酶(0.25%)能否分离出MDSC呢？如果可以消化顺序和各自时间大约多少呢？因为这个dispase实在是太贵了，谢谢

ysfu

太有收获了！

87hgl

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$ {6 t" K7 V- T& `9 g4 p% V
你好，具体问一下胶原酶的型号，我也在养肌源性干细胞，用的是1型胶原酶，1%浓度（这时看到一篇博士论文上说的），是不是浓度有点高，第二天就见到细胞贴壁的。

87hgl

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' m( H1 _* W1 K: J, q- g$ C; L" a( [/ Q: }
说错了，应该是第二天没有见到细胞贴壁的~~~