肌源性干细胞 组织消化 几种酶的 量化 比例！请高手指教！

学习快乐

现在本人 正在 提取分离 肌源性干细胞，但几次都是因为消化过度，第二天细胞死亡，以失败告终。' y0 t7 Z3 E! \5 P$ [3 B
请高手指教，胶原酶 dispase 和 胰酶的 具体 建议 毫升数 和比例。

tanhehe1006

胶原酶0.1%就凑效了
+ g6 y  m- P# [$ d% f4 Adispase我用的是二型，只要总单位数在2.4U/ml就可以了
: \, q9 G. [- d4 \5 Q0 p以上两个酶有混加的也有分开的，终浓度掌握好。液体和组织块的比例一般在5-1：1都是有效的
7 B$ R$ r, ]. L最后胰酶的消化建议还是轻一些，1：4就好，用PBS稀释

学习快乐

多谢。

学习快乐

做了 几次，细胞经常污染。
. M/ w0 J6 ~* S: `1 x( k! K最后一次 细胞已经长到 pp5了，又污染了。
% j2 r7 s5 W9 R3 V: C+ e  P实验室条件是差。& J1 O  C6 d: y; u+ p" w
但感觉是不是 操作 还是 培养基有问题呢？
/ d5 |3 A- M7 D/ m- R把培养基 放在培养瓶里面 放培养箱 没有发现污染。
* G+ l$ L7 t  Z各位高手 能不能 给点 你们 成功的 详细 步骤 指导指导啊。

hyde

可能是环境，试剂问题，要相信自己的操作，我在国外交流养myoblast，就照着他们的protocol做的，不太会污染，过程基本类似

lxp10405

终于看到外文版的具体细胞培养步骤了。多谢！

无知后辈

回复 tanhehe1006 的帖子: l- P9 X+ k& t1 [0 Y2 l& Y
1 H5 N% g4 A. J, c
请问我使用I型胶原酶（0.1%）加上胰酶(0.25%)能否分离出MDSC呢？如果可以消化顺序和各自时间大约多少呢？因为这个dispase实在是太贵了，谢谢

ysfu

太有收获了！

87hgl

回复 tanhehe1006 的帖子- O" I- G. ^5 ?6 O' w/ `

: e3 Z2 ~9 t9 f# k& K你好，具体问一下胶原酶的型号，我也在养肌源性干细胞，用的是1型胶原酶，1%浓度（这时看到一篇博士论文上说的），是不是浓度有点高，第二天就见到细胞贴壁的。

87hgl

回复 tanhehe1006 的帖子) Z/ Z# A6 S# k0 d7 p+ z2 {% u- Q

- D/ `3 O6 Y  x7 N$ a! N说错了，应该是第二天没有见到细胞贴壁的~~~