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楼主: bypw	go MSCS诱导分化后的免疫细胞化学鉴定 [复制链接]

duoduo777001

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楼主

发表于 2010-5-10 23:14 |显示全部帖子

我做的是脂肪的，步骤跟你有点不一样：
固定，3.5%PFA，30min* w8 d/ n/ z4 t: H
透膜，15min RT8 A5 o$ ^) a% X- H1 c5 R, F
封闭，1%BSA 1h RT dark/ B4 B% |: {& t& b! k" ^
加抗体之前我都洗了的
过夜后，拿出来直接洗，在加2抗。( d( {" y {- q
最后加入DAPI 10ug/ml

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duoduo777001

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沙发

发表于 2010-5-11 11:12 |显示全部帖子

回复 8# lorey # [: P# ~( r" D, B) j

2 o {! `3 }8 [0 C. k' _
wash buffer我一直都是用的1XPBS，DAPI用的是10ug/ml，做过孵育一个小时的，也做过过夜的，个人觉得过夜的效果好一点，但是理论上是两个都可以。另外我们DAPI洗过之后，会在用mounting solution固定。避光4°条件可以保存一个月。