feeder cell 消化问题 成团下来

youyou315

请教各位战友，我最近铺的小鼠滋养层细胞在干细胞传代消化时总是成团状的掉下来，37度3－5min消化之后滋养层细胞总是成絮状，吹打不开，不知道是什么原因？ 板子是用0.1％gelatin 处理过的。

dilal

我也遇到了楼主的问题，消化时大片的膜状物脱落了下来，感觉像是MEF分泌的一层膜样的东西。消化时不能过度晃动细胞瓶，最好不要拍打细胞瓶，这样就很容易形成絮状物。但是我们消化明胶铺板的MEF时，就没有出现这种问题，也不知道是什么原因。最好是让胰酶消化时间足够，使细胞自己悬起来比较好。

exin11

其实有时会成团，吹打不开的～你要看细胞状态而定。传代时，稍微的稀一些（可也别太稀，那样长不好），一代的时间，以293T细胞看约为两天，就得传，时间长后，会成簇，非常不好吹散～～
8 o$ b% i6 E  B, v8 |8 I还有就是成簇可能是因为你的酶活性不好，酶不要反复的温度变化，那样就不好准确计算其中的浓度，这样影响消化结果～～

esc123esc

我也是出现一样的情况，消化下来的都是成团的MEF，吹不散，不能形成单细胞，有时候连在一起絮状的一片片的吹不散，不知道怎么办，传下去之后局部会一大团，很头疼这个问题啊，我用的也是0.05%的胰酶啊，自己配的，不知道是不是自己配的胰酶有问题啊，大家都用的是买的成品吗，还是自己配的啊胰酶

大猪小猪落玉盘

那种东西到底是什么细胞分泌的？什么成分？本人在传代过程中也经常遇到。

ruofan1982

我是0.1%gelatin包被10分钟就可以用了

xjya

回复 9# youyou315
* b, S* i0 l% y) K1 f2 S
+ |$ S8 m2 m1 i; |- m( T
0 _  O; T5 u, I2 F. q$ {    打错了,是0.1%gelatin。还有铺盘的时候要混匀gelatin溶液，种细胞前将gelatin吸干。不过你说的问题之前我没有遇到过，只是提供信息供你参考

xjya

回复 9# youyou315 / n/ j) O/ p6 g

3 o6 z9 x; s; z: T! n. p# a5 ^: v# e+ j4 _6 E0 U
    1% gelatin 4度过夜或37度培养箱内2小时

afei198520

回复 8# xjya 2 ^2 B! {3 F4 W

5 E5 H: o3 K& u5 Z& ^赞同，我们也是用的0.05%的胰酶，效果也很好

youyou315

感谢大家的热心讨论和帮助，我仔细观察了消化下来的细胞团，现在认为可能是gelatin的问题，因为感觉消化的时候gelatin也整块脱离下来，在显微镜下观察了一下，上面粘附了很多细胞。我一般铺gelatin 是37度 5-10min, 或者室温 20－30min， 是不是gelatin作用时间的问题？