神经球传代问题？？

smkx

神经球的消化难易和物种及年龄关系挺大的。同样的方法，tryple消化胎鼠神经球37℃，5min,吹到40次左右即可。但成体猪的需要反复消化3次才可以成为单细胞。我一般是离心800r/3min。

angelyannan

然后1000枪头吹打即可打散。

angelyannan

觉得离心转速有点大了，建议在你收集细胞悬液后静止收集神经球，或者500rpm离心2-3分钟收集。tryple消化4-5分钟即可，容纳后1000枪头吹打即可打散。

luckydog

用0.025%的胰酶-EDTA消化神经球

guojingjing

回复 4# lujn100 ; [3 x0 I: i# V

  J6 i: _0 s; j8 i9 H/ Z4 L# i: m/ w2 F& X3 g7 q
    神经干细胞还能分化出小胶质细胞？小胶质细胞不是起源于骨髓吗？在发育过程中从外周进入脑内的

get0715

神经球的传代问题确实不太好解决，你根据自己的实验做一组消化时间的梯度实验吧，相同多的细胞，加入相同浓度的酶消化，1分钟为梯度，看哪种最容易消化为单细胞，并且活性好不容易贴壁分化。

get0715

回复 6# wgydys . _% L% N8 b' k

/ Q* v0 K. ]( n/ R* B. }  T7 g6 c神经球不是贴壁细胞，看不见消化程度。如果细胞有突起贴壁，细胞很可能就已经分化了。

wgydys

消化时间长短需要根据镜下观察决定，只要细胞间连接带明显可见和粗大即可，每种细胞的消化时间不一样。

lujn100

回复 2# wgydys
1 l+ O- J8 i1 W0 f) c% H2 y5 \
  S9 U9 Q) c" {$ I5 k- @7 ~9 p; a' }# ^4 U& K4 Q! B# t9 Y
    用pbs反复洗，会不会对细胞损伤太大啊？而且我的培养基里都没有血清的，你在传代的时候一般吹多少下可以吹散啊？

lujn100

回复 3# zsc78
# |) u1 l! J+ W9 a4 T1 x) q
7 T0 t* e- V' q8 o. S/ @7 [
) l8 g9 s* W4 b8 E* z0 T; o. s    谢谢哦~
7 q7 O1 _1 e- p6 [/ [7 \% B7 V4 P    我的培养基里是不加血清的，用你的方法大概需要消化多长时间呢？我用普通胰酶接种原代细胞时消化5min，发现细胞基本都贴壁了，分化出好多小胶质，是不是消化太厉害了，所以我现在都不敢用普通胰酶了....