骨髓间充质干细胞的培养

Sophia

请教一下，我最近两次养的骨髓间充质干细胞总是不贴壁，贴壁的非常少，这可能是什么原因呢？谢谢！

细胞海洋

上传图片 最好有方法步骤 大家才能帮助你找问题原因

tingwuyu

就是了，这样子让人怎么解答

贝西高原

检查一下操作程序

Sophia

4 l* f! ~. S. H8 ?# V0 l2 O! X
这是照片，请大家帮忙看一看，这是什么问题呀？
6 g2 t+ r0 h5 a1 }$ ~. M谢谢！

mojai

不是不贴壁，上面的亮圆点有可能是造血干细胞，骨髓间充质干细胞不纯，建议采用贴壁时间差法换液洗去杂细胞。
1 A, j9 Y& z. W' a0 C看照片上贴壁的细胞状态也不是很好，建议原代接种的细胞密度高一些，因为你种的细胞中还含有大量的杂细胞
: r1 H0 j! p  {( Z! j还有你试验的步骤、试剂都没有，不好从这些方面分析，总之，细胞状态是由综合的因素决定的

大海

有些因素会影响贴壁的 比如你用肝素抗凝 如果肝素浓度太高 就会影响贴壁 一般24小时后就可以首次换液了 换液除去不贴壁的血细胞 也有3-5天首次换液的 看自己的情况决定首次换液的时间 看你的细胞如果是首次换液后的情况 应该贴壁的细胞挺多的 因为细胞增殖很快 一两天就要传代一次

Sophia

实验步骤：2只2周SD鼠，脱颈处死，酒精中浸泡5分钟，PBS冲洗，分离股骨、胫骨，5ml注射器吸取DMEM培养液冲出骨髓，800转离心5分钟，接种到两瓶75mm培养瓶中，48小时首次换液。  换液后，观察贴壁的细胞很少，而且，之后的数天内，细胞状态越来越差，且生长很慢，这可能是什么原因呢？

Sophia

上述图片是原代3天的照片

大海

如果是原代第三天的照片 那么细胞说明贴壁的还不少 如果正常情况下 再换一次液 除去不贴壁的细胞 再过一两天就会长满 就可以传代了 而且你用的培养基血清的浓度 及血清的质量都会影响你的细胞的生长的 一般来说 含10%-15%血清的培养基就可以 如果血清浓度再高 会引起细胞分化的