谈下平末端连接的感受

王乾

DNA平末端连接的效率本来就比较低 注意下面的几个方面
( T' e0 ?. a* Z% N, N1.平末端连接时,以载体与片段末端的摩尔比为1：3 作为参考值3 Y, M/ O$ I! C4 }, u, H) p+ M
2.连接时,T4DNA 连接酶的浓度应比粘末端连接时高8～10 倍% X% }. Q3 z( |4 ^9 _0 n; k1 U
3.增加连接的时间，有文献说反应条件在4 ℃,12 h 最好
; K5 b) u  ?' i6 v3 |$ Z* a# j4.加入凝聚剂，30%PEG 8000 1~1.5μl（10微升体系）

王乾

你干嘛用Smal切载体呢？用Xmal切产生粘性末端，连接效率要高很多的，不信你试试。