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本帖最后由 细胞海洋 于 2010-7-29 09:58 编辑
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4 f3 z3 {* y. j, o1 i刚刚接触神经干细胞培养,遇到了不少问题,希望大家能多照顾照顾,集思广益.感激不尽。
9 H7 X: R7 a6 D) R/ w) K! h 1、 出生24h内的SD大鼠,取海马,肉眼下除脑膜及血管,可参考多数文献,都说是在显微镜下除脑膜及血管的,这影响大不大呢?: \; x5 ^/ `/ q9 L5 G; n4 T3 p
2、0.125%胰酶/EDTA,37℃消化10min,10%血清终止消化,1000r/min离心10min,DMEM/F12洗涤一次,200目筛网过滤。接种后镜下观察可看到条索状的物质,是不是消化过头了?而且接种数小时后镜下观察发现,细胞聚集成团了,是不是消化没充分啊?矛盾中。
. T5 L4 G0 x; [9 X+ U: G3、我采用的是不含血清的完全培养基(DMEM/F12 1:1+2%B27+FGF 20ng/ml+EGF 20ng/ml+2% L-Glu),可一般在培养2~3天后,发现细胞营养不够,很少出现神经细胞球。是不是我的培养基成分有问题呢? |
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