干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 干细胞之家论坛 干细胞实验室技术交流 神经干细胞专区 奇怪,神经干细胞消化后传代后细胞都消失了?(附图)
朗日生物

免疫细胞治疗专区

欢迎关注干细胞微信公众号

  
查看: 115606|回复: 16
go

奇怪,神经干细胞消化后传代后细胞都消失了?(附图)   [复制链接]

Rank: 2

积分
125 
威望
125  
包包
1652  
楼主
发表于 2010-8-12 21:53 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 细胞海洋 于 2010-8-12 22:30 编辑
, S' G# X4 n7 Q3 M* d6 ?1 i5 n6 C" t" _9 _
昨天给原代的神经干细胞传代(是第十天的原代细胞),传代前干细胞球还是挺好的。但是我用0.25%的胰酶消化成单细胞再过两天就什么细胞都没了,不知什么原因?请各位帮帮忙看看。我的胰酶是配好2月在-20℃冰箱里存放的。传代方法是:1。将培养瓶中的悬浮细胞及培养液吸入离心管1000转每分中离心5分钟。2。经上清液的一半加入新的培养瓶中(半量换液),其余的上清液吸掉,在沉淀中加入胰酶混匀,边用吸管吹打,约十分钟。3。再离心1000转每分 5分钟。4。吸掉上清液,加入新鲜培养基混匀后转入培养瓶中。因为怕用血清终止消化的话已引起神经干细胞分化,所以没用血清终止消化。不知道为什么到第二天一看,什么细胞都没有了,只有些细胞碎片。
: {4 o7 K, b; e( ^# _这是传代前的神经干细胞球,大家看看应该没什么问题吧?
附件: 你需要登录才可以下载或查看附件。没有帐号?注册
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 10 + 20 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 10  包包 + 20   查看全部评分

Rank: 2

积分
125 
威望
125  
包包
1652  
沙发
发表于 2010-8-13 11:15 |显示全部帖子
回复 2# uyunbilig
5 z6 w% H! S, {: X5 L谢谢,我试试您的方法看吧。

Rank: 2

积分
125 
威望
125  
包包
1652  
藤椅
发表于 2010-8-13 11:18 |显示全部帖子
回复 4# rhmm ( F1 \$ r" J  r  @) ]
我用吸管直接吹打时,干细胞球分散不开,所以就用胰酶消化了,您是用的吸管直接吹散的吗?因为看很多文献上都是半量换液,所以就采用了。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 5   查看全部评分

Rank: 2

积分
125 
威望
125  
包包
1652  
板凳
发表于 2010-8-13 11:20 |显示全部帖子
干细胞之家微信公众号
回复 6# dulaiyouyu ) g+ Q7 x0 q, Z8 k
我离心完后在显微镜下看了,还有干细胞球的,所以应该不是离心的问题吧。

Rank: 2

积分
125 
威望
125  
包包
1652  
报纸
发表于 2010-8-13 11:22 |显示全部帖子
本帖最后由 xfyang2007123 于 2010-8-13 11:23 编辑
2 v6 s. i# A# _( {; v
* f% U& U- T1 ]% t+ P) R回复 7# exin11 & E7 G1 h0 `  o0 t6 e( ^7 W
谢谢建议,很多方面确实容易出问题,就只能挨点找原因了。另外我们这里的离心机是较老的那种,500转每分一个档,所以调不到900啊。

Rank: 2

积分
125 
威望
125  
包包
1652  
地板
发表于 2010-8-14 09:50 |显示全部帖子
回复 12# jason
& E. |) W/ d* L) F谢谢指点。

Rank: 2

积分
125 
威望
125  
包包
1652  
7
发表于 2010-8-14 09:51 |显示全部帖子
回复 13# sfk06 9 z+ ~) k8 Y5 ~, ]& P# p0 m
因为是原代培养首次传代,所以没有以前的经验,谢谢。

Rank: 2

积分
125 
威望
125  
包包
1652  
8
发表于 2010-8-14 09:53 |显示全部帖子
回复 14# dulaiyouyu % u- Z/ E# M9 h+ D# }7 w: a  W) i
哦,木瓜蛋白酶,不知道贵不贵,因为资金也有限,另外,请问您都是用这种酶消化的吗?效果怎么样?

Rank: 2

积分
125 
威望
125  
包包
1652  
9
发表于 2010-8-14 09:56 |显示全部帖子
回复 16# liyong7732
2 V# y6 n8 z" K养这些东西确实比较费钱,太珍贵了,多谢祝福。我再摸摸条件吧。养了好几个月终于有点头绪了,但还很不成熟。

Rank: 2

积分
125 
威望
125  
包包
1652  
10
发表于 2010-8-14 09:59 |显示全部帖子
回复 17# mumudan
  s" y; I8 {6 [0 {: Q谢谢仁兄指点,要是能成功就太好了。
‹ 上一主题|下一主题
你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备2021004615号-3 )

GMT+8, 2025-5-29 18:38

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.