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奇怪,神经干细胞消化后传代后细胞都消失了?(附图)   [复制链接]

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楼主
发表于 2010-8-12 21:53 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 细胞海洋 于 2010-8-12 22:30 编辑 " U; k2 y8 _9 C! }% W

! P4 q( G, l0 R. I! u; V6 y9 r昨天给原代的神经干细胞传代(是第十天的原代细胞),传代前干细胞球还是挺好的。但是我用0.25%的胰酶消化成单细胞再过两天就什么细胞都没了,不知什么原因?请各位帮帮忙看看。我的胰酶是配好2月在-20℃冰箱里存放的。传代方法是:1。将培养瓶中的悬浮细胞及培养液吸入离心管1000转每分中离心5分钟。2。经上清液的一半加入新的培养瓶中(半量换液),其余的上清液吸掉,在沉淀中加入胰酶混匀,边用吸管吹打,约十分钟。3。再离心1000转每分 5分钟。4。吸掉上清液,加入新鲜培养基混匀后转入培养瓶中。因为怕用血清终止消化的话已引起神经干细胞分化,所以没用血清终止消化。不知道为什么到第二天一看,什么细胞都没有了,只有些细胞碎片。
$ n: ]: M2 Z! O这是传代前的神经干细胞球,大家看看应该没什么问题吧?
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沙发
发表于 2010-8-13 11:15 |显示全部帖子
回复 2# uyunbilig 8 Q1 U  ^5 Y/ x1 y8 L4 f! F; ?
谢谢,我试试您的方法看吧。

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藤椅
发表于 2010-8-13 11:18 |显示全部帖子
回复 4# rhmm
  f/ a) n/ E* ^# u# a% m我用吸管直接吹打时,干细胞球分散不开,所以就用胰酶消化了,您是用的吸管直接吹散的吗?因为看很多文献上都是半量换液,所以就采用了。
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板凳
发表于 2010-8-13 11:20 |显示全部帖子
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回复 6# dulaiyouyu
( j0 }5 S5 w* T6 v: f6 C# J我离心完后在显微镜下看了,还有干细胞球的,所以应该不是离心的问题吧。

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报纸
发表于 2010-8-13 11:22 |显示全部帖子
本帖最后由 xfyang2007123 于 2010-8-13 11:23 编辑 7 w6 y. t$ z! D* y
& X& j6 p! d7 h2 ]/ W7 @
回复 7# exin11 : d& _3 r8 `% l8 b5 N1 @! O
谢谢建议,很多方面确实容易出问题,就只能挨点找原因了。另外我们这里的离心机是较老的那种,500转每分一个档,所以调不到900啊。

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地板
发表于 2010-8-14 09:50 |显示全部帖子
回复 12# jason
# t6 k# F( u& V/ s谢谢指点。

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发表于 2010-8-14 09:51 |显示全部帖子
回复 13# sfk06
- ~9 S( n, n" f2 G! m因为是原代培养首次传代,所以没有以前的经验,谢谢。

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发表于 2010-8-14 09:53 |显示全部帖子
回复 14# dulaiyouyu ' m! M* F' F. m7 C  c7 }3 [3 W
哦,木瓜蛋白酶,不知道贵不贵,因为资金也有限,另外,请问您都是用这种酶消化的吗?效果怎么样?

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发表于 2010-8-14 09:56 |显示全部帖子
回复 16# liyong7732
6 D2 F0 b: R* M6 ^6 p0 H& P9 a4 f养这些东西确实比较费钱,太珍贵了,多谢祝福。我再摸摸条件吧。养了好几个月终于有点头绪了,但还很不成熟。

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发表于 2010-8-14 09:59 |显示全部帖子
回复 17# mumudan 7 c) R4 f7 o; q/ n! c
谢谢仁兄指点,要是能成功就太好了。
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