奇怪，神经干细胞消化后传代后细胞都消失了？（附图）

xfyang2007123

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昨天给原代的神经干细胞传代（是第十天的原代细胞），传代前干细胞球还是挺好的。但是我用0.25%的胰酶消化成单细胞再过两天就什么细胞都没了，不知什么原因？请各位帮帮忙看看。我的胰酶是配好2月在-20℃冰箱里存放的。传代方法是：1。将培养瓶中的悬浮细胞及培养液吸入离心管1000转每分中离心5分钟。2。经上清液的一半加入新的培养瓶中（半量换液），其余的上清液吸掉，在沉淀中加入胰酶混匀，边用吸管吹打，约十分钟。3。再离心1000转每分 5分钟。4。吸掉上清液，加入新鲜培养基混匀后转入培养瓶中。因为怕用血清终止消化的话已引起神经干细胞分化，所以没用血清终止消化。不知道为什么到第二天一看，什么细胞都没有了，只有些细胞碎片。
: {4 o7 K, b; e( ^# _这是传代前的神经干细胞球，大家看看应该没什么问题吧？

xfyang2007123

回复 2# uyunbilig
5 z6 w% H! S, {: X5 L谢谢，我试试您的方法看吧。

xfyang2007123

回复 4# rhmm ( F1 \$ r" J  r  @) ]
我用吸管直接吹打时，干细胞球分散不开，所以就用胰酶消化了，您是用的吸管直接吹散的吗？因为看很多文献上都是半量换液，所以就采用了。

xfyang2007123

回复 6# dulaiyouyu ) g+ Q7 x0 q, Z8 k
我离心完后在显微镜下看了，还有干细胞球的，所以应该不是离心的问题吧。

xfyang2007123

2 v6 s. i# A# _( {; v
* f% U& U- T1 ]% t+ P) R回复 7# exin11 & E7 G1 h0 `  o0 t6 e( ^7 W
谢谢建议，很多方面确实容易出问题，就只能挨点找原因了。另外我们这里的离心机是较老的那种，500转每分一个档，所以调不到900啊。

xfyang2007123

回复 12# jason
& E. |) W/ d* L) F谢谢指点。

xfyang2007123

回复 13# sfk06 9 z+ ~) k8 Y5 ~, ]& P# p0 m
因为是原代培养首次传代，所以没有以前的经验，谢谢。

xfyang2007123

回复 14# dulaiyouyu % u- Z/ E# M9 h+ D# }7 w: a  W) i
哦，木瓜蛋白酶，不知道贵不贵，因为资金也有限，另外，请问您都是用这种酶消化的吗？效果怎么样？

xfyang2007123

回复 16# liyong7732
2 V# y6 n8 z" K养这些东西确实比较费钱，太珍贵了，多谢祝福。我再摸摸条件吧。养了好几个月终于有点头绪了，但还很不成熟。

xfyang2007123

回复 17# mumudan
  s" y; I8 {6 [0 {: Q谢谢仁兄指点，要是能成功就太好了。