请各位高手指点

zhang_tao1985

养了骨髓间充质干细胞，用的是4周龄大鼠，取的双侧股骨，用全骨髓法培养的，24小时全量换液，然后每72小时换液一次，5天之后的细胞是这样的
( I( i3 x& Q7 A
! s+ G; h5 N3 R6 f/ p7 B1 i, \但是到了第11天的细胞是这样了，师兄说大部分已经死了
+ E/ N9 {2 _! g2 d$ ~+ B: ~' f+ s) d- ?& B; l, d
应该是7天就传代了，但是那时没有长到80%融合，所以请高手指点
: p  @$ k9 N* G6 p5 T5 M用的是10%FBS的DMEM培养基，每瓶加入5ml左右$ ?2 Q  K% t. b& c0 k
感谢了！

lchanlon

你用的是T25的瓶子吧，

exin11

你把换液的过程说说，不知有没有失误。  10%的FBS刚开始可以高些，可以13%。到后来再减下来！

zhang_tao1985

回复 3# exin11
# V! X3 w4 N- H! D2 L除去消毒过程之外，倾斜培养瓶，弯头吸管吸出培养基，然后分三到四次沿着侧壁加入4ml左右的培养基，然后直接放入培养箱里面了。谢谢~下次我去试试FBS高一点的培养基的培养效果。

zhang_tao1985

回复 2# lchanlon
2 r! o5 v/ `7 D& x/ _. u+ h: r
6 G6 q( }6 d6 R6 j8 k. ^/ w" r是啊，这个和瓶子还有关系？

lchanlon

T75你加5ml的培养基会不会有点儿少啊！

exin11

回复 4# zhang_tao1985
* g& t: ~& t& F1 w; G7 P& Q. f( X0 h0 C3 U" p8 Q9 M

& M. N2 e' s- |* I  a. O   是全换液？刚开始四分之三换吧

zhang_tao1985

回复 6# lchanlon
: W) B# V  ~( C3 v是t25的瓶子

zhang_tao1985

回复 7# exin11
+ m: V2 l) q' Q2 {* v9 D  {4 \; f0 ~是全换的，呵呵，现在新养了一批，到现在长的还算不错~这次应该是处理的比较快，骨髓的缺血缺氧时间比较短

exin11

回复 9# zhang_tao1985 ; C( w7 F* S/ N2 j$ `

" T9 B+ Z8 N9 J, E" {0 B' y8 [
1 }. Y/ s! M- E7 v- K    ok