细胞污染了是什么原因？

zhao__jc

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我培养的sf9昆虫细胞污染了，里面可以看到有些会动的虫虫，像蝌蚪一样，请问是什么东西啊？什么原因可以造成这样的污染？哪位高手赐教？

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细胞培养中细胞污染的微生物污染源主要有：细菌、真菌、支原体、病毒、非同种细胞
% p: h6 F& i- M* T9 ~7 t细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素，也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。
: c0 a5 H$ x/ U, x1 X　　培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。 / Y; Y* Z" H8 X, _
真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。 * Y! C6 Y2 B+ x0 d% B2 W1 d
　　培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。 ' P8 b3 a2 v+ s8 B2 A- v) |1 V
　　真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡

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支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件下生存，对青霉素有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。 % E6 R# J% Z- d) I. e8 l
　　培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理，还会产生交叉污染。 8 b7 [: x4 Y0 u9 v1 O1 f

6 o" D5 z' [" i" a% o　　组织细胞培养过程中，如果没有除去潜在的病毒，就会产生病毒污染。目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。 ) g8 H+ v! O% \! @
　　尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题

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防止污染方法
% h: j& G5 o  K( |( r一般预防可从以下几方面着手：
! }' E& k: `% V$ [& H　　1、添加抗生素 & }: U# J' P5 @8 n
　　2、从物品、用品消毒灭菌着手
* d, r  h2 Y7 V! A% Q1 Z　　细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。
0 |6 ^4 @& N, B+ B/ ]8 W+ ^4 L　　操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。
2 l# l0 F: Q9 O, H8 j　　3、从操作者做起
: j$ `  M8 t4 n# a" Y　　（1）进无菌室前要用肥皂洗手，按规定穿隔离衣。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。 : c5 j' G* X, r" {0 Q& L
　　（2）操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。 . U# T8 Q8 N- V8 a8 Y
　　（3）操作时要常更换吸管，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。 " F0 v5 q" z6 U  W
　　4、防止细胞交叉污染
. k+ x# z* T9 ]# q1 s. J; Q* s　　在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分。
( x6 h0 B) l1 R+ X  c* @* ]/ Q　　在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。
+ A* w2 p" D' m, _. z# G- h　　细胞一旦购置或从别处引入，均应及早留种冻存，一旦发生污染可重新复苏培养。
+ F+ D. P7 Q% S　　5、无菌室的彻底消毒 6 V7 Z: q% T1 }  y
　　1) 0.1%新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室；
7 w& @. Y9 A, d- |　　2）甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气休对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。

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污染问题只有你亲身体验了你就知道啦！恭喜你，又学到了很多吧！

catheryne

正在为培养瓶中的小黑点发愁，真是雪中送炭啊