急求神经干细胞诱导分化后死亡的原因！！！！！

guojingjing

最近在做神经干细胞相关的实验，但是到分化这一部分就遇到瓶颈了。我的实验方法是使用P0小鼠的海马培养神经干细胞，培养基为DMEM/F12+B27+bFGF+EGF，细胞为悬浮培养的神经球。第三代细胞用于实验，分散为单细胞后种入PLL包被的24孔板，换分化培养基（DMEM/F12+B27+0.1%FBS），24h细胞伸出较长突起，48h后细胞突起更细，胞体变圆变小，96h后胞体基本呈碎片状，难以进行后续实验。
. a) R. u" w" _* D5 @- o     两年前做大鼠SVZ干细胞的时候用的同样的方法，细胞就可以到第7天后分化为3种细胞，但是现在细胞不到4天就死了，欲哭无泪，因为找不到原因。
% e& G4 e% w4 g3 V/ U) D9 p. C6 p     尝试过将细胞首先用增殖培养基使其贴别生长24h后再换分化培养基，或者用10%的FBS，都没有用。9 r8 \, C, A+ Q6 {. O+ z# d
     恳请高手指教！急！！！！！

nculsa747

我给出一个可能的原因：用24孔做分化时，吸/加包被液或培液时，操作应快，或者吸一个，加一个。不然就干掉了。我在做HESC分化，可以探讨一下，呵，QQ 562371333