
- 积分
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最近在做神经干细胞相关的实验,但是到分化这一部分就遇到瓶颈了。我的实验方法是使用P0小鼠的海马培养神经干细胞,培养基为DMEM/F12+B27+bFGF+EGF,细胞为悬浮培养的神经球。第三代细胞用于实验,分散为单细胞后种入PLL包被的24孔板,换分化培养基(DMEM/F12+B27+0.1%FBS),24h细胞伸出较长突起,48h后细胞突起更细,胞体变圆变小,96h后胞体基本呈碎片状,难以进行后续实验。
. a) R. u" w" _* D5 @- o 两年前做大鼠SVZ干细胞的时候用的同样的方法,细胞就可以到第7天后分化为3种细胞,但是现在细胞不到4天就死了,欲哭无泪,因为找不到原因。
% e& G4 e% w4 g3 V/ U) D9 p. C6 p 尝试过将细胞首先用增殖培养基使其贴别生长24h后再换分化培养基,或者用10%的FBS,都没有用。9 r8 \, C, A+ Q6 {. O+ z# d
恳请高手指教!急!!!!! |
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