SD大鼠骨髓间充质干细胞，又失败了，不知问题出在哪儿

qiongyacc

p0代一般增值速度很慢，根据情况换液，一般开始细胞少时3d或4d换液一次，细胞多的时候2d一次，一般都要7-10天，看你接种的密度了，我看你细胞状态还可以，先换液看看不要丢了！; `! t- Y7 I: f+ r9 [4 W8 `
而且你传代的密度完全可以长起来的，有文献报道按极低密度接种的话细胞的活性更好！不易老化，就是长的速度稍微慢一点，可能需要10-12天！

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楼主的细胞传代后状态明显不好，是不是跟吹打过程有关系，能否试着增加胰酶的浓度以利于消化，我同学养的也是SD大鼠的BMSCs，P0代生长很好，传代也是遇到跟你一样的问题了，这次准备再取一次，消化的时候不吹打。

why121

每个实验室的显微镜都有差别哦 想我这个同学做的就和我照的40倍效果都不一样

qwmwolf

回复 23# wsrz 6 ]7 s8 u3 F$ O6 `4 w& m% X

1 v  r1 ?" u! c( Z; j6 }
( I0 G8 D" d' I& w) w7 m$ M( e; `- q    不会吧，那白点点也太小了哦。

wsrz

回复  why121
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* y- ~0 H7 S1 g9 Z    这种小的白点点是什么东西哦，像是污染了吧。9 J7 [* x/ u3 c8 y7 \
qwmwolf 发表于 2010-9-1 21:36

9 d/ u1 v& P" H3 V
7 G4 N, A) d- R0 A2 U$ S% i* c
4 V9 L* N+ k4 Y7 o
    可能是杂细胞。他的这个细胞形态和克隆看着都不错的

wsrz

调整细胞密度吧，密度太低。还有就是培养液和血清一定要用进口的 最好都是GIBCO的，影响很大啊: o8 G( E$ ^& b
xihuzi0217 发表于 2010-9-1 21:29

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2 ]' V/ s; B. ?; d6 L4 S   有人曾经提出是否接种密度低。我不太清楚应该怎样增加密度，我是一只老鼠两侧股骨的骨髓装一个50ml的瓶里，培养基约4ml。培养基和血清都是进口的

wsrz

回复  wsrz
2 i+ h" ~7 ?7 S# |; Y/ M7 ^* y0 l, ]- L+ E
我们养的大鼠MSC，消化的时候只要有EDTA都是很快被消化下来的，不超过1min。1 q: H; t$ M( E! ?  G6 Z
有个别时候也 ...1 R; Z/ N, w. m7 I
bingo 发表于 2010-9-1 21:24

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9 B: K; B0 M6 A9 f" Y3 f+ d$ C' q
6 F1 A- o  Q2 C& w- X) [! m, E+ ]    就是啊，正常的大鼠MSC消化时间1min左右吧。如果说鼠的来源，都是动物中心买的，共取了二十来只老鼠了，结果都差不多。

qwmwolf

回复 12# why121
% C" D1 N) k; e5 C4 F: P% D9 u* M% x; S* A9 D) e6 D6 G0 c& K
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    这种小的白点点是什么东西哦，像是污染了吧。

xihuzi0217

调整细胞密度吧，密度太低。还有就是培养液和血清一定要用进口的 最好都是GIBCO的，影响很大啊

bingo

回复 17# wsrz
" A( M% A5 B% v, e& H! C: H/ k5 C6 M- m( I( Q/ q) e! y
我们养的大鼠MSC，消化的时候只要有EDTA都是很快被消化下来的，不超过1min。
3 m" b) d1 g9 X% Y有个别时候也会有你这样的现象，总结是老鼠的问题（也不知道是不是这个原因哈）有的老鼠的骨头剪起来很费力气，有的却像骨质疏松一样，吹出的骨髓也少。