SD大鼠骨髓间充质干细胞，又失败了，不知问题出在哪儿

qiongyacc

p0代一般增值速度很慢，根据情况换液，一般开始细胞少时3d或4d换液一次，细胞多的时候2d一次，一般都要7-10天，看你接种的密度了，我看你细胞状态还可以，先换液看看不要丢了！
; D1 h' {4 ?' |, W( U* A$ I2 q而且你传代的密度完全可以长起来的，有文献报道按极低密度接种的话细胞的活性更好！不易老化，就是长的速度稍微慢一点，可能需要10-12天！

267318024

楼主的细胞传代后状态明显不好，是不是跟吹打过程有关系，能否试着增加胰酶的浓度以利于消化，我同学养的也是SD大鼠的BMSCs，P0代生长很好，传代也是遇到跟你一样的问题了，这次准备再取一次，消化的时候不吹打。

why121

每个实验室的显微镜都有差别哦 想我这个同学做的就和我照的40倍效果都不一样

qwmwolf

回复 23# wsrz   h3 ^2 X' o7 z# p; `$ I; [: ]. y

& ?# i5 r9 @3 g2 T9 V
, L& X4 H7 z- H/ d4 A7 N5 Z    不会吧，那白点点也太小了哦。

wsrz

回复  why121 ; ~9 _, b% @! D" Z) P

: T/ `: g( A' |  K
2 ^1 C5 L* r- [7 g$ O6 {" J    这种小的白点点是什么东西哦，像是污染了吧。
; D* d1 j( p6 K$ i% @1 xqwmwolf 发表于 2010-9-1 21:36

1 S. c# e& w( A2 Y2 G, X
8 R. {1 T% j! w8 f: R4 l' I$ _& G# Q$ D( V7 V+ L% H
    可能是杂细胞。他的这个细胞形态和克隆看着都不错的

wsrz

调整细胞密度吧，密度太低。还有就是培养液和血清一定要用进口的 最好都是GIBCO的，影响很大啊
5 d1 f! H1 A9 }% b. Oxihuzi0217 发表于 2010-9-1 21:29

# Y+ \% m( S! G
4 |4 L( F; R! Z
1 h2 g, C) H* q* \9 n  b4 l: i   有人曾经提出是否接种密度低。我不太清楚应该怎样增加密度，我是一只老鼠两侧股骨的骨髓装一个50ml的瓶里，培养基约4ml。培养基和血清都是进口的

wsrz

回复  wsrz
$ E) z5 o- [7 T8 j0 L' M3 m" b0 k7 }0 ^1 p: i
我们养的大鼠MSC，消化的时候只要有EDTA都是很快被消化下来的，不超过1min。" ^$ `/ i8 @6 m+ |6 g5 J, V
有个别时候也 ...$ C' k4 F: N+ |* [, p& S) V
bingo 发表于 2010-9-1 21:24

* Y3 R/ z5 J, F2 a& N

" ]6 u9 @: E/ u  t5 P" z4 s2 a
* |! X0 F7 D$ ]# K2 {    就是啊，正常的大鼠MSC消化时间1min左右吧。如果说鼠的来源，都是动物中心买的，共取了二十来只老鼠了，结果都差不多。

qwmwolf

回复 12# why121
! D+ _" Y" z. D0 @$ v
; l" o) G& b! c! U9 b: \
# w' r5 ]& r' l/ o2 J3 A( M    这种小的白点点是什么东西哦，像是污染了吧。

xihuzi0217

调整细胞密度吧，密度太低。还有就是培养液和血清一定要用进口的 最好都是GIBCO的，影响很大啊

bingo

回复 17# wsrz " V* t4 z& A( `6 R% T0 g

8 B6 v4 U: }" S. ~& T8 m5 a我们养的大鼠MSC，消化的时候只要有EDTA都是很快被消化下来的，不超过1min。* J5 T& k! L% ^1 r7 g+ \2 k) I
有个别时候也会有你这样的现象，总结是老鼠的问题（也不知道是不是这个原因哈）有的老鼠的骨头剪起来很费力气，有的却像骨质疏松一样，吹出的骨髓也少。