SD大鼠骨髓间充质干细胞，又失败了，不知问题出在哪儿

wsrz

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我们实验室同学做大鼠的是用低糖的DMEM，HYCLONE的血清10%的浓度，2只股骨冲下来的骨髓种2个25CM2瓶子 48H后 ...; j  d' a( V$ V4 K# L
why121 发表于 2010-9-1 18:48

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" C5 E' H2 D2 _( y( C- k$ {( Q5 o1 J# Y- P: D( x2 _
    谢谢你的分享。老鼠选的3周龄的，刚断奶。我是一只大鼠两侧股骨冲下来的骨髓装一个50ml培养瓶，24小时半量或72小时全量换液，培养出来的结果差不多，细胞在原代时形态就不规则了，论坛里同学说是老化了。我用胰酶+EDTA消化，很难消化，基本靠吹打。传代后状态也不太好。我找不出原因在哪儿。难道跟夏天天气有关

wsrz

是不是其他细胞太多了
. K! |3 y; y7 h/ A) S0 L8 rjqm12345 发表于 2010-9-1 17:34

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    杂细胞是有点多。如果养得好，在传代的过程中会逐渐纯化。

wsrz

我想问一下，怎么评价干细胞养好了呢。& \) A/ _5 t. r% F# ?6 e! r" c* p* s
qwmwolf 发表于 2010-9-1 11:14

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: i! T0 y  J" t8 ^7 O# w    除了依靠表面抗原鉴定和诱导分化来判断你是否养出了干细胞，平时在养的过程中，主要就是靠观察形态来判断了。好的干细胞原代应呈克隆样聚集生长、主要细胞形态梭形、易消化、传代后细胞活力较好。

wsrz

我养的人得也是这样，现在都P3了，也是一代大概需要15天才能长满，可是还是有明显的扩增趋势。学姐说，P5代 ...
3 P) o2 k  [2 o# Yhanchao 发表于 2010-9-1 00:37

4 O& z/ H4 ^- P' R& ~8 m9 }2 q" h4 k/ h8 v- r8 `! u0 J

6 u7 G* X5 g, t9 p    长得好的细胞，一般5天就能传一代了。

wsrz

培养基不是应该用低糖的DMEM吗？4 V* C2 I$ O5 W# n% M: g1 m
bingo 发表于 2010-8-31 18:32

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    恩，培养基有好几种可以选择的。比如低糖DMEM、α-MEM、DMEM/F12，都有人培养出来的。我一个师姐用过好几种培养基培养，最后用的DMEM/F12养出来了。

why121

我们实验室同学做大鼠的是用低糖的DMEM，HYCLONE的血清10%的浓度，2只股骨冲下来的骨髓种2个25CM2瓶子 48H后全量换液，细胞状态不错 很羡慕~消化时间不超过2分钟 用的0.125%的胰酶+0.01的EDTA 楼主可以尝试下，具体需要我再问下同学 附上他做的照片 还有你要注意鼠的周龄等问题吧

jqm12345

是不是其他细胞太多了

qwmwolf

我想问一下，怎么评价干细胞养好了呢。

hanchao

我养的人得也是这样，现在都P3了，也是一代大概需要15天才能长满，可是还是有明显的扩增趋势。学姐说，P5代后会好。不知道能不能，等待ing~~~

bingo

培养基不是应该用低糖的DMEM吗？