SD大鼠骨髓间充质干细胞，又失败了，不知问题出在哪儿

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我们实验室同学做大鼠的是用低糖的DMEM，HYCLONE的血清10%的浓度，2只股骨冲下来的骨髓种2个25CM2瓶子 48H后 ...
( J- e2 H1 U- a8 J" x- [why121 发表于 2010-9-1 18:48

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7 q% l6 |3 s. L0 H+ B, ~    谢谢你的分享。老鼠选的3周龄的，刚断奶。我是一只大鼠两侧股骨冲下来的骨髓装一个50ml培养瓶，24小时半量或72小时全量换液，培养出来的结果差不多，细胞在原代时形态就不规则了，论坛里同学说是老化了。我用胰酶+EDTA消化，很难消化，基本靠吹打。传代后状态也不太好。我找不出原因在哪儿。难道跟夏天天气有关

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回复  wsrz
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3 \4 u! Q6 L0 c7 |7 F( H. A* m$ I) v我们养的大鼠MSC，消化的时候只要有EDTA都是很快被消化下来的，不超过1min。
  o/ S  v2 D, g" s. d, K  q有个别时候也 ...
: a9 V4 s$ d% c# b  I: ibingo 发表于 2010-9-1 21:24

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    就是啊，正常的大鼠MSC消化时间1min左右吧。如果说鼠的来源，都是动物中心买的，共取了二十来只老鼠了，结果都差不多。

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调整细胞密度吧，密度太低。还有就是培养液和血清一定要用进口的 最好都是GIBCO的，影响很大啊
. B6 s  }2 b$ E+ L* T- e& Axihuzi0217 发表于 2010-9-1 21:29

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" _9 k' t, [2 J2 A   有人曾经提出是否接种密度低。我不太清楚应该怎样增加密度，我是一只老鼠两侧股骨的骨髓装一个50ml的瓶里，培养基约4ml。培养基和血清都是进口的

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回复  why121 4 h" B. G' M' x6 L
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    这种小的白点点是什么东西哦，像是污染了吧。1 b5 E3 K, U, I! @- j$ S9 U, F
qwmwolf 发表于 2010-9-1 21:36

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    可能是杂细胞。他的这个细胞形态和克隆看着都不错的