SD大鼠骨髓间充质干细胞，又失败了，不知问题出在哪儿

jqm12345

是不是其他细胞太多了

why121

我们实验室同学做大鼠的是用低糖的DMEM，HYCLONE的血清10%的浓度，2只股骨冲下来的骨髓种2个25CM2瓶子 48H后全量换液，细胞状态不错 很羡慕~消化时间不超过2分钟 用的0.125%的胰酶+0.01的EDTA 楼主可以尝试下，具体需要我再问下同学 附上他做的照片 还有你要注意鼠的周龄等问题吧

wsrz

培养基不是应该用低糖的DMEM吗？
5 [0 A% h6 m( ~' Rbingo 发表于 2010-8-31 18:32

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- v0 f* U! j0 U( s# t* e% W: a5 K- [2 e: x
    恩，培养基有好几种可以选择的。比如低糖DMEM、α-MEM、DMEM/F12，都有人培养出来的。我一个师姐用过好几种培养基培养，最后用的DMEM/F12养出来了。

wsrz

我养的人得也是这样，现在都P3了，也是一代大概需要15天才能长满，可是还是有明显的扩增趋势。学姐说，P5代 ...1 G0 d$ D1 k% I, f
hanchao 发表于 2010-9-1 00:37

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) P) ?6 ~* o* \0 n    长得好的细胞，一般5天就能传一代了。

wsrz

我想问一下，怎么评价干细胞养好了呢。
! C7 ?% T# b) wqwmwolf 发表于 2010-9-1 11:14

) B+ Z. `; `: n! @2 i" k0 E
' X/ i. x4 I+ J/ n9 P
* i3 B- S; l- ~2 N7 T1 f    除了依靠表面抗原鉴定和诱导分化来判断你是否养出了干细胞，平时在养的过程中，主要就是靠观察形态来判断了。好的干细胞原代应呈克隆样聚集生长、主要细胞形态梭形、易消化、传代后细胞活力较好。

wsrz

是不是其他细胞太多了
; U' R5 g! R3 W& Bjqm12345 发表于 2010-9-1 17:34

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+ t2 u6 b4 h0 }: e* U# w) N9 l8 q% j1 P; U. O# v& M9 U9 W3 G: r( v
    杂细胞是有点多。如果养得好，在传代的过程中会逐渐纯化。

wsrz

* R# m$ [, j7 P4 ?

我们实验室同学做大鼠的是用低糖的DMEM，HYCLONE的血清10%的浓度，2只股骨冲下来的骨髓种2个25CM2瓶子 48H后 ...: ?! [) ~0 i9 I0 H& o7 o
why121 发表于 2010-9-1 18:48

) k) K& P0 s/ b5 j- L

, Z7 l9 r3 F; _
0 H4 r( e. Z( G; \$ u" U    谢谢你的分享。老鼠选的3周龄的，刚断奶。我是一只大鼠两侧股骨冲下来的骨髓装一个50ml培养瓶，24小时半量或72小时全量换液，培养出来的结果差不多，细胞在原代时形态就不规则了，论坛里同学说是老化了。我用胰酶+EDTA消化，很难消化，基本靠吹打。传代后状态也不太好。我找不出原因在哪儿。难道跟夏天天气有关

bingo

回复 17# wsrz
7 ^* p3 N$ N* U: M; f- f4 i, b$ |' [, _' D+ F7 e* N7 s6 k
我们养的大鼠MSC，消化的时候只要有EDTA都是很快被消化下来的，不超过1min。
/ |3 S9 c' e, V" _: ?有个别时候也会有你这样的现象，总结是老鼠的问题（也不知道是不是这个原因哈）有的老鼠的骨头剪起来很费力气，有的却像骨质疏松一样，吹出的骨髓也少。

xihuzi0217

调整细胞密度吧，密度太低。还有就是培养液和血清一定要用进口的 最好都是GIBCO的，影响很大啊

qwmwolf

回复 12# why121 0 n( @1 p) ]: u( H  }2 i; D
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' ^/ l' \4 F8 a! M2 v3 m0 S1 z4 E    这种小的白点点是什么东西哦，像是污染了吧。