SD大鼠骨髓间充质干细胞，又失败了，不知问题出在哪儿

wsrz

回复  wsrz
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我们养的大鼠MSC，消化的时候只要有EDTA都是很快被消化下来的，不超过1min。
) s# d  L1 g; M, u- }; }- }+ {有个别时候也 ...
$ J8 l/ g4 b  K+ Q9 s$ Kbingo 发表于 2010-9-1 21:24

2 e$ V+ _: J- j- z; m: J5 ~
, p) z9 N4 G8 \7 ?$ @, g/ g
0 Q" ]# |9 {2 ~# H+ m" @/ V    就是啊，正常的大鼠MSC消化时间1min左右吧。如果说鼠的来源，都是动物中心买的，共取了二十来只老鼠了，结果都差不多。

wsrz

调整细胞密度吧，密度太低。还有就是培养液和血清一定要用进口的 最好都是GIBCO的，影响很大啊6 a3 z9 e4 p( O* x/ b
xihuzi0217 发表于 2010-9-1 21:29

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" E( o8 H6 [, m' E2 C5 e# x   有人曾经提出是否接种密度低。我不太清楚应该怎样增加密度，我是一只老鼠两侧股骨的骨髓装一个50ml的瓶里，培养基约4ml。培养基和血清都是进口的

wsrz

回复  why121
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" j$ @' w3 U. a. L
6 m6 O; n0 y' l, r( T0 _0 c# k5 f    这种小的白点点是什么东西哦，像是污染了吧。7 H! Y6 ~7 V4 Y) Z) C( A" r
qwmwolf 发表于 2010-9-1 21:36

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. W5 n; ?3 v7 j' H( f6 @    可能是杂细胞。他的这个细胞形态和克隆看着都不错的

qwmwolf

回复 23# wsrz
7 h: |# B+ j" m$ C8 c1 D: v+ R3 X2 y( Z# n0 P5 P

4 W1 h1 D( v7 c9 ]( ^3 H    不会吧，那白点点也太小了哦。

why121

每个实验室的显微镜都有差别哦 想我这个同学做的就和我照的40倍效果都不一样

267318024

楼主的细胞传代后状态明显不好，是不是跟吹打过程有关系，能否试着增加胰酶的浓度以利于消化，我同学养的也是SD大鼠的BMSCs，P0代生长很好，传代也是遇到跟你一样的问题了，这次准备再取一次，消化的时候不吹打。

qiongyacc

p0代一般增值速度很慢，根据情况换液，一般开始细胞少时3d或4d换液一次，细胞多的时候2d一次，一般都要7-10天，看你接种的密度了，我看你细胞状态还可以，先换液看看不要丢了！
$ b# \- Y/ B' E. h* s而且你传代的密度完全可以长起来的，有文献报道按极低密度接种的话细胞的活性更好！不易老化，就是长的速度稍微慢一点，可能需要10-12天！

sara

密度真的有很大的关系吗？消化的时候吹打有影响吗？6 T7 P* T. }+ k/ L
我做的原代长得很好，但消化的很慢，反复吹打细胞才下来。传瓶之后有的种的密度就小一些，长得确实慢一点，但是感觉状态和形态还挺好的。目前正在等待长得满一些。
, l4 u4 B  A- |+ I( b要是做诱导的话，要等细胞长得满一些再做是吧？

一一

原代细胞会杂有很多其他细胞，细胞粘连比较多，从楼主原代图片看，细胞种瓶时吹打不够，细胞贴壁时都粘连在一起，且不均匀，而在传代后，会逐渐变好。传代图片看接种密度有些低，如果按1传2，可能和你传代时细胞汇合不够有关，还有你的消化液及时间有关，不过从形态看，细胞状态可以。

一一

原代细胞会杂有很多其他细胞，细胞粘连比较多，从楼主原代图片看，细胞种瓶时吹打不够，细胞贴壁时都粘连在一起，且不均匀，而在传代后，会逐渐变好。传代图片看接种密度有些低，如果按1传2，可能和你传代时细胞汇合不够有关，还有你的消化液及时间有关，不过从形态看，细胞状态可以。