SD大鼠骨髓间充质干细胞，又失败了，不知问题出在哪儿

wsrz

回复  wsrz
! X0 [; E/ {; l$ u: n
( y- h( b1 B/ o0 }8 F我们养的大鼠MSC，消化的时候只要有EDTA都是很快被消化下来的，不超过1min。# x% s2 f! `- k( w5 w2 I: f' I
有个别时候也 .../ B- I& H3 h# v2 _! ]2 b( [
bingo 发表于 2010-9-1 21:24

7 C' c; A% ^5 V$ Q- L/ T& l% E

) Z- y) Q2 A7 s' Z6 o: d- [: p  g: E
* I" v" `0 K. t7 u8 @    就是啊，正常的大鼠MSC消化时间1min左右吧。如果说鼠的来源，都是动物中心买的，共取了二十来只老鼠了，结果都差不多。

wsrz

调整细胞密度吧，密度太低。还有就是培养液和血清一定要用进口的 最好都是GIBCO的，影响很大啊
6 l4 K+ q$ d' U+ k- G% fxihuzi0217 发表于 2010-9-1 21:29

6 K/ r; u- o* i& a/ C, J; R1 e% S3 \. q# p

7 k+ m) R: Q1 A   有人曾经提出是否接种密度低。我不太清楚应该怎样增加密度，我是一只老鼠两侧股骨的骨髓装一个50ml的瓶里，培养基约4ml。培养基和血清都是进口的

wsrz

回复  why121 - C) \2 L( E0 T$ O" ^( b8 Z

" d6 c( C5 ]& ~4 j1 i0 @# D+ b/ R. e( a! g: @! `% `, b; G
    这种小的白点点是什么东西哦，像是污染了吧。
; c8 i: {/ b4 m4 [; \1 h4 Qqwmwolf 发表于 2010-9-1 21:36

( v0 s9 K2 Y$ P* E3 V" q4 t1 c
- s) V. C9 \' Z7 y
    可能是杂细胞。他的这个细胞形态和克隆看着都不错的

qwmwolf

回复 23# wsrz
$ f3 ?" l/ `; [& ^6 B2 y0 X+ G3 L/ ^. G1 j6 T! z/ n  M& c
+ l2 A! |8 Z9 `" g  M, ^' q
    不会吧，那白点点也太小了哦。

why121

每个实验室的显微镜都有差别哦 想我这个同学做的就和我照的40倍效果都不一样

267318024

楼主的细胞传代后状态明显不好，是不是跟吹打过程有关系，能否试着增加胰酶的浓度以利于消化，我同学养的也是SD大鼠的BMSCs，P0代生长很好，传代也是遇到跟你一样的问题了，这次准备再取一次，消化的时候不吹打。

qiongyacc

p0代一般增值速度很慢，根据情况换液，一般开始细胞少时3d或4d换液一次，细胞多的时候2d一次，一般都要7-10天，看你接种的密度了，我看你细胞状态还可以，先换液看看不要丢了！
6 Y/ G6 h& E7 t# q而且你传代的密度完全可以长起来的，有文献报道按极低密度接种的话细胞的活性更好！不易老化，就是长的速度稍微慢一点，可能需要10-12天！

sara

密度真的有很大的关系吗？消化的时候吹打有影响吗？
# t' t3 h4 e$ v8 F我做的原代长得很好，但消化的很慢，反复吹打细胞才下来。传瓶之后有的种的密度就小一些，长得确实慢一点，但是感觉状态和形态还挺好的。目前正在等待长得满一些。  N; J. k! S& f& m! l8 Y4 i8 G
要是做诱导的话，要等细胞长得满一些再做是吧？

一一

原代细胞会杂有很多其他细胞，细胞粘连比较多，从楼主原代图片看，细胞种瓶时吹打不够，细胞贴壁时都粘连在一起，且不均匀，而在传代后，会逐渐变好。传代图片看接种密度有些低，如果按1传2，可能和你传代时细胞汇合不够有关，还有你的消化液及时间有关，不过从形态看，细胞状态可以。

一一

原代细胞会杂有很多其他细胞，细胞粘连比较多，从楼主原代图片看，细胞种瓶时吹打不够，细胞贴壁时都粘连在一起，且不均匀，而在传代后，会逐渐变好。传代图片看接种密度有些低，如果按1传2，可能和你传代时细胞汇合不够有关，还有你的消化液及时间有关，不过从形态看，细胞状态可以。