SD大鼠骨髓间充质干细胞，又失败了，不知问题出在哪儿

wsrz

回复  wsrz $ M; C8 T; M6 ~* s) Z( Q

* ?* u7 E2 A; e2 f1 N- V, F我们养的大鼠MSC，消化的时候只要有EDTA都是很快被消化下来的，不超过1min。! \; ^, E* l2 k  r- L! \; V! l# I
有个别时候也 ...: q0 M6 p" A( H* f; H
bingo 发表于 2010-9-1 21:24

+ Y" l; e. k# }$ X9 W9 R
, {) |- E8 ]+ ^0 O4 O) L; p! V6 S

) b& p# Z: ?4 i7 q/ X4 e8 c  G' K    就是啊，正常的大鼠MSC消化时间1min左右吧。如果说鼠的来源，都是动物中心买的，共取了二十来只老鼠了，结果都差不多。

wsrz

调整细胞密度吧，密度太低。还有就是培养液和血清一定要用进口的 最好都是GIBCO的，影响很大啊
% J$ }: q+ a3 `: n% @* Hxihuzi0217 发表于 2010-9-1 21:29

6 P/ N& U; L2 i' U" q/ ~) e

& L1 u7 L$ S3 H' ~' h4 P1 l: o5 g9 E0 ?8 W" L! [! o( M8 n
   有人曾经提出是否接种密度低。我不太清楚应该怎样增加密度，我是一只老鼠两侧股骨的骨髓装一个50ml的瓶里，培养基约4ml。培养基和血清都是进口的

wsrz

回复  why121 9 ]6 E. w9 t& F0 R

) W" d  d. P) D  T, U7 z9 E1 E
7 I, _* T. p. F+ U    这种小的白点点是什么东西哦，像是污染了吧。: s+ Y5 ~& f& t4 A
qwmwolf 发表于 2010-9-1 21:36

' t9 E# h7 _$ b
& @' b8 t# C7 P) P2 p

1 ]0 i0 \! p6 v  C' _5 {    可能是杂细胞。他的这个细胞形态和克隆看着都不错的

qwmwolf

回复 23# wsrz ; ~) g% H4 |) L

6 f0 D# Q8 b$ g' c0 s5 U, a: p8 a8 ]# V" S! D5 _4 `! u  @
    不会吧，那白点点也太小了哦。

why121

每个实验室的显微镜都有差别哦 想我这个同学做的就和我照的40倍效果都不一样

267318024

楼主的细胞传代后状态明显不好，是不是跟吹打过程有关系，能否试着增加胰酶的浓度以利于消化，我同学养的也是SD大鼠的BMSCs，P0代生长很好，传代也是遇到跟你一样的问题了，这次准备再取一次，消化的时候不吹打。

qiongyacc

p0代一般增值速度很慢，根据情况换液，一般开始细胞少时3d或4d换液一次，细胞多的时候2d一次，一般都要7-10天，看你接种的密度了，我看你细胞状态还可以，先换液看看不要丢了！
  A8 I8 a3 l( `# T而且你传代的密度完全可以长起来的，有文献报道按极低密度接种的话细胞的活性更好！不易老化，就是长的速度稍微慢一点，可能需要10-12天！

sara

密度真的有很大的关系吗？消化的时候吹打有影响吗？
. o, s8 z+ m; n% C8 R我做的原代长得很好，但消化的很慢，反复吹打细胞才下来。传瓶之后有的种的密度就小一些，长得确实慢一点，但是感觉状态和形态还挺好的。目前正在等待长得满一些。
; J+ r: F" q4 T. t! K要是做诱导的话，要等细胞长得满一些再做是吧？

一一

原代细胞会杂有很多其他细胞，细胞粘连比较多，从楼主原代图片看，细胞种瓶时吹打不够，细胞贴壁时都粘连在一起，且不均匀，而在传代后，会逐渐变好。传代图片看接种密度有些低，如果按1传2，可能和你传代时细胞汇合不够有关，还有你的消化液及时间有关，不过从形态看，细胞状态可以。

一一

原代细胞会杂有很多其他细胞，细胞粘连比较多，从楼主原代图片看，细胞种瓶时吹打不够，细胞贴壁时都粘连在一起，且不均匀，而在传代后，会逐渐变好。传代图片看接种密度有些低，如果按1传2，可能和你传代时细胞汇合不够有关，还有你的消化液及时间有关，不过从形态看，细胞状态可以。