SD大鼠骨髓间充质干细胞，又失败了，不知问题出在哪儿

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大家看图吧

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原代培养第5天[attachimg]

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; m8 f" t2 C: ]# \1 C原代培养5天后传代。这是P1第2天照的[attachimg]

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P1第3天[attachimg]

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DMEM/F12培养基，进口胎牛血清，10%血清浓度，培养基里加双抗。24h半量换液和72h首次换液均试过，传代时胰酶+EDTA消化3分钟后吹打。可是结果还是不尽人意。抓狂了，难道操作有问题。

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其实没有严格每次都计数板计数，曾经计数过，是1X10^7/cm2。而且我的细胞从来消化都不不好，消化三分钟都下不来，都是靠吹打

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培养基不是应该用低糖的DMEM吗？
6 T5 [) G9 C/ d% X- v3 nbingo 发表于 2010-8-31 18:32

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: |" K6 c: g. \    恩，培养基有好几种可以选择的。比如低糖DMEM、α-MEM、DMEM/F12，都有人培养出来的。我一个师姐用过好几种培养基培养，最后用的DMEM/F12养出来了。

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我养的人得也是这样，现在都P3了，也是一代大概需要15天才能长满，可是还是有明显的扩增趋势。学姐说，P5代 ...
. F7 Q1 }6 U" a- bhanchao 发表于 2010-9-1 00:37

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- L% e1 x3 P% a9 i    长得好的细胞，一般5天就能传一代了。

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我想问一下，怎么评价干细胞养好了呢。; D3 C6 f1 Z/ v! h7 R6 }
qwmwolf 发表于 2010-9-1 11:14

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    除了依靠表面抗原鉴定和诱导分化来判断你是否养出了干细胞，平时在养的过程中，主要就是靠观察形态来判断了。好的干细胞原代应呈克隆样聚集生长、主要细胞形态梭形、易消化、传代后细胞活力较好。

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是不是其他细胞太多了. O% Y& N7 W, N! g
jqm12345 发表于 2010-9-1 17:34

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    杂细胞是有点多。如果养得好，在传代的过程中会逐渐纯化。