最近也在尝试着分离小鼠的epiblast，请教各位前辈几个问题

sapery279

最近也在尝试着分离小鼠的epiblast，请教各位前辈几个问题，请大家帮忙：" t" R5 V) m$ T1 r9 M
1.分离时用的是E5.5天的小鼠，品系是ICR，方法是参考epiblast最初的两篇文章，还有小鼠胚胎操作手册上的方法，但是对子宫进行操作时并没有发现类似文章中出现的胚胎结构（为向科研献身的小鼠默哀）。有没有成功分过前辈提供下经验。谢谢！
! v  D" n7 h& \5 h3 c) ^2.看大家先前的讨论，提到mES向epiSC的转变，将mES放在episc的培养条件下即可。mES的维持主要是LIF，episc主要是activin/Nodal，将生长因子改变就可以吗？feeder还有换培养基时的mES状态有没有严格要求？想求详细的paper,谢谢！; N% F2 t" N; L7 L8 {$ L
3.楼主提到关于episc形成嵌合体的情况，能否分享下那篇“将EpiSC导入到pre—implantation的囊胚中”这样的文章？谢谢！

smkx

5.5dpc的小鼠很难分离子宫膜和蜕膜。你可以用6.5dpc的分离下试试，或许就会发现。

sapery279

谢谢！请问，着床后早期的胚胎（E5.5-E6.5）有没有什么特别明显的外观可以与周围的组织区分开来？

smkx

回复 3# sapery279
! t0 B6 u0 N0 c  h# R
& @) X! Y/ F2 n  v* I3 w9 p4 w2 q
    有的。剥去蜕膜后，小鼠胚胎应该有明显的红色的胚外滋养层和透明的胚体。呈长条状。很容易脱落。

smkx

http://www.stemcell8.cn/thread-19334-1-1.html
3 m" i% v3 J* a& ?- h3 O这是视频。

sapery279

回复 5# smkx
! X: w$ `+ O9 C: e0 V7 ?5 s4 O8 i7 Q/ n9 X# a- y
) U/ r- U+ s! [. C2 P/ y
  谢谢！但是我权限不够，看不到这个视频，能不能提供下可以直接看到的网址，或是发到我的邮箱sapery279@126.com？

smkx

回复 6# sapery279
( E* M( G8 G9 p1 }7 L
3 A* W& D# ?, o8 x+ e5 ~& M8 M3 C6 Z
   视频已经发送。请验收。

sapery279

回复 7# smkx
0 K& r0 j% F8 f1 |. ~( G. q" y4 l# x' H
已收到，非常感谢！

sapery279

* ]0 E! F. i$ x

3 O6 W8 w3 y$ B+ A7 |) a* ^* l这个是刚刚找到的一个分离小鼠胚胎6.5天的胚胎的视频，正好可以当个资源将整个操作连在一起。5 A7 \* ^% u; q# V5 y$ @% a
0 p* b( p* Q4 r8 D- n7 R5 |- ]

l19rna

楼主你搞定了吗？求指教啊，我最近也要分离5.5天dpc小鼠。请问的分离胚胎的器械是要多精细的才好了？我用眼科镊，还是觉得太粗了，胚胎分离的不太好