MSCV-IRES-GFP的详细图谱

彩虹

请问有使用MSCV-IRES-GFP这个逆转录病毒载体的吗？我想知道这个载体的详细图谱，有的可以分享一下吗？谢谢

深海寂寞鱼

7 H( R  }5 Y& v8 C; ]& H( X/ Y
) ]) G6 Y# ^+ x& Z. _; c7 b
楼主，你好。
) r4 s) {2 |4 A8 N- q& f
, Z$ a3 B0 l9 }- Z0 L, i6 }你所说的载体是一个改造而成的载体。
$ y6 j& _4 f8 [
5 ~8 q1 f3 a# T# _5 `按照Addgene网站上的说法，是把 pCITE IRES hGFP-3M 载体用EcoR I和Sal I 酶切后，获得IRES-hGFP-3M。然后插入用EcoR I和Sal I 酶切后的MSCV2.2载体。+ B) K/ @# v# ^. F3 @% a
; y0 Z$ x; `0 V
详细的图谱如下：; S9 v6 g# T5 d* c
0 ~; L) J  k& L# }* T4 k

9 B- K- ~' `" f3 x2 g. D& a4 a  m0 k+ I" j' }2 a0 ]
2 l; Q7 Z5 y2 D4 e4 G
另外附上pMSCV的说明书，供你参考。  9 G( N2 Y0 }! |( E5 J- y( z

zhangcuiping

回复 2# 深海寂寞鱼
" L; J& k* G$ i& G非常感谢您的回复，谢谢

youyan1228

回复 深海寂寞鱼 的帖子0 j0 q* I4 n/ k) M. @! C
) j5 n+ X  `, `3 z6 U1 A) e
请问您有这个质粒吗

youyan1228

回复 zhangcuiping 的帖子  ?, S  u( l+ s$ ]
8 E/ h* _  r) G, u9 w6 L' P  l
请问您有这个质粒吗，能否分享，谢谢

Jing937

请问您有这个质粒或者知道国内哪有卖的吗？谢谢！

runsong

我奉劝你千万别用这个载体，以及所有PMSCV系列载体。
" r; s2 k7 m4 ?1 }" B8 ~这些都是逆转录病毒载体，包装效率、感染率都很低，面临被淘汰的命运。可以注意一下应用逆转录病毒载体的文章现在已经很少了，慢病毒载体已经更新3代了，逆转录病毒载体几乎无人问津、没有发展。
" H. ^4 v! Y, O1 N我曾经用过这个系列的载体，MSCV-IRES-GFP的表达效率低得可怜，60皿中转完后就1、2个细胞是亮的，更别提攻毒了。用PMSCV做的载体我他妈的反反复复折腾了一年，连病毒颗粒都没得到。期间我还构建了PMSCV-GFP载体，转PT67后就5%能亮，攻毒四次后目的细胞完全没有GFP的表达。真他妈不知道用这套系统的文章是咋发的。
; O: }9 d+ F$ a& z  |. z! F我们实验室有个博士，和我一起做这个，他比我强，但折腾了两年也没得到稳定的结果。诚实的他在他的博士论文里只字未提他这方面的工作。

runsong

嘿嘿，我宝贵的一年时间全浪费在这里面了。/ R$ S, N( C+ [% r4 R7 F- b
我建议你顺应潮流，做慢病毒吧，资料相对要多得多，效果相对要好很多。
# |9 ]: [( b# p7 M如果不要求稳转，只是想提高转染效率的话可以用腺病毒。操作更简单，转染效果更好。) y2 V) s1 Y5 W

7 v- z, }% i; f当时我老板得到这个载体像得到宝贝似的，然我做这个。是啊，别人给的东西不花钱，总想低投入高产出。哪里有那么好的事。

runsong

看看我“不再自残”的签名，那是我那个时候的伤疤

ada800515

请教一下runsong ，是不是所有的逆转录病毒载体都转染效率低啊？我用pMX-IRES-GFP转染时效率也特别低，不知道你是否用过这个质粒啊？