MSCV-IRES-GFP的详细图谱

彩虹

请问有使用MSCV-IRES-GFP这个逆转录病毒载体的吗？我想知道这个载体的详细图谱，有的可以分享一下吗？谢谢

深海寂寞鱼

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$ M: n# ?/ U( \; h% F楼主，你好。1 K2 R3 E2 p+ w. l

0 v) J" w. {0 L. O  P: N2 B你所说的载体是一个改造而成的载体。  k: n: ~) t- C; g
* A% b2 q( X/ ~
按照Addgene网站上的说法，是把 pCITE IRES hGFP-3M 载体用EcoR I和Sal I 酶切后，获得IRES-hGFP-3M。然后插入用EcoR I和Sal I 酶切后的MSCV2.2载体。
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详细的图谱如下：
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; k- ?! g$ P$ |8 m3 O另外附上pMSCV的说明书，供你参考。  ; g! M5 h5 r. a+ C

zhangcuiping

回复 2# 深海寂寞鱼 9 _0 D) t' p0 S6 y7 t( N
非常感谢您的回复，谢谢

youyan1228

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请问您有这个质粒吗

youyan1228

回复 zhangcuiping 的帖子" b( X1 K3 N: n9 q% V' ^

6 L' B# H( m% f4 E5 B9 J# f请问您有这个质粒吗，能否分享，谢谢

Jing937

请问您有这个质粒或者知道国内哪有卖的吗？谢谢！

runsong

我奉劝你千万别用这个载体，以及所有PMSCV系列载体。# y- U; e6 V. a2 }6 t# U8 _
这些都是逆转录病毒载体，包装效率、感染率都很低，面临被淘汰的命运。可以注意一下应用逆转录病毒载体的文章现在已经很少了，慢病毒载体已经更新3代了，逆转录病毒载体几乎无人问津、没有发展。
& M; ^7 m" S$ @* K' D" g) C我曾经用过这个系列的载体，MSCV-IRES-GFP的表达效率低得可怜，60皿中转完后就1、2个细胞是亮的，更别提攻毒了。用PMSCV做的载体我他妈的反反复复折腾了一年，连病毒颗粒都没得到。期间我还构建了PMSCV-GFP载体，转PT67后就5%能亮，攻毒四次后目的细胞完全没有GFP的表达。真他妈不知道用这套系统的文章是咋发的。
+ O3 S- y% ?* ~9 t5 ^. p/ `' Z我们实验室有个博士，和我一起做这个，他比我强，但折腾了两年也没得到稳定的结果。诚实的他在他的博士论文里只字未提他这方面的工作。

runsong

嘿嘿，我宝贵的一年时间全浪费在这里面了。
- ?, l5 }$ }* D/ f" o# U我建议你顺应潮流，做慢病毒吧，资料相对要多得多，效果相对要好很多。
! x* l: @1 U8 o. ^如果不要求稳转，只是想提高转染效率的话可以用腺病毒。操作更简单，转染效果更好。+ _, P+ s/ n( x$ E# a
6 j2 C- c& Y8 C! F+ F2 D
当时我老板得到这个载体像得到宝贝似的，然我做这个。是啊，别人给的东西不花钱，总想低投入高产出。哪里有那么好的事。

runsong

看看我“不再自残”的签名，那是我那个时候的伤疤

ada800515

请教一下runsong ，是不是所有的逆转录病毒载体都转染效率低啊？我用pMX-IRES-GFP转染时效率也特别低，不知道你是否用过这个质粒啊？