MSCV-IRES-GFP的详细图谱

彩虹

请问有使用MSCV-IRES-GFP这个逆转录病毒载体的吗？我想知道这个载体的详细图谱，有的可以分享一下吗？谢谢

深海寂寞鱼

: d; W# F- l" N& N3 ~% U
0 V4 x! i3 R& e$ D4 ^* `5 T3 x
楼主，你好。. e; B( ], m5 d  w% V7 [- T
: e" G& P5 `0 R/ M. }  w
你所说的载体是一个改造而成的载体。
, k/ H8 s( q% b8 ~! q2 T5 @
. O6 k! d; b) f5 T0 H( C0 `  A' d6 h- ]按照Addgene网站上的说法，是把 pCITE IRES hGFP-3M 载体用EcoR I和Sal I 酶切后，获得IRES-hGFP-3M。然后插入用EcoR I和Sal I 酶切后的MSCV2.2载体。. B& B  q* |" W$ `+ g! N

* b5 a3 }" {; n2 u  v) K详细的图谱如下：
! V! g# b7 C/ W5 J* Q. k; f, k# j6 u( X3 h& \  u8 R
- O6 a5 Z2 L" e* r" l* \( j7 g, g
; s/ ~9 x% h! {
7 T4 ]4 u$ Y- \) r+ B: f
另外附上pMSCV的说明书，供你参考。  - b  Y; @* w8 R+ G+ n

zhangcuiping

回复 2# 深海寂寞鱼   n( I2 r# t& O+ B% ~" ?
非常感谢您的回复，谢谢

youyan1228

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" N/ n3 a0 Q2 \4 X( W; r, i6 R7 ~) G$ z9 [' r0 s
请问您有这个质粒吗

youyan1228

回复 zhangcuiping 的帖子6 O# H9 m  M! @0 j- A  G

5 p# ]. D6 _0 m0 \8 O请问您有这个质粒吗，能否分享，谢谢

Jing937

请问您有这个质粒或者知道国内哪有卖的吗？谢谢！

runsong

我奉劝你千万别用这个载体，以及所有PMSCV系列载体。2 w* j' Y0 n  a: y
这些都是逆转录病毒载体，包装效率、感染率都很低，面临被淘汰的命运。可以注意一下应用逆转录病毒载体的文章现在已经很少了，慢病毒载体已经更新3代了，逆转录病毒载体几乎无人问津、没有发展。
+ w: z4 v8 \! `  w我曾经用过这个系列的载体，MSCV-IRES-GFP的表达效率低得可怜，60皿中转完后就1、2个细胞是亮的，更别提攻毒了。用PMSCV做的载体我他妈的反反复复折腾了一年，连病毒颗粒都没得到。期间我还构建了PMSCV-GFP载体，转PT67后就5%能亮，攻毒四次后目的细胞完全没有GFP的表达。真他妈不知道用这套系统的文章是咋发的。
  j; C# k4 w: u' Q" {$ D我们实验室有个博士，和我一起做这个，他比我强，但折腾了两年也没得到稳定的结果。诚实的他在他的博士论文里只字未提他这方面的工作。

runsong

嘿嘿，我宝贵的一年时间全浪费在这里面了。) E+ ^" E! j& S# B  p
我建议你顺应潮流，做慢病毒吧，资料相对要多得多，效果相对要好很多。3 ]  X% \. ~$ W3 `! O
如果不要求稳转，只是想提高转染效率的话可以用腺病毒。操作更简单，转染效果更好。
; c5 o1 ~4 h1 |7 K( V8 k
: I  B1 c0 ~6 m- p- U+ U' c. O% A' E2 g当时我老板得到这个载体像得到宝贝似的，然我做这个。是啊，别人给的东西不花钱，总想低投入高产出。哪里有那么好的事。

runsong

看看我“不再自残”的签名，那是我那个时候的伤疤

ada800515

请教一下runsong ，是不是所有的逆转录病毒载体都转染效率低啊？我用pMX-IRES-GFP转染时效率也特别低，不知道你是否用过这个质粒啊？