急求油红O 染色提取法的原理步骤

richard_terry

油红O 染色提取法，先谢谢了
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lxy07

油红O为脂溶性,它是目前被认为最优良的脂肪染色染料,在脂肪内能高度溶解,从而染色,能保存组织中的脂肪滴* E4 ]) n! ?, t$ w! B
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染色步骤： 4 w5 u$ I1 U6 ]5 u( ?' j1 S7 e4 B; n, w

$ Q4 Q  |5 ^# Z  Q) w$ o1 先小心轻缓倒去培养夜。
, o; K1 L1 q+ d& W/ _2 用PBS轻缓漂洗（不洗没问题）。
8 N8 O2 C# ]/ Z2 _1 o3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。甲醛对脂肪没有什么固定，但能固定好脂肪细胞膜，不让脂肪移位。 / S+ J" x# i: j$ v
4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。 ( L$ q/ [0 Y  W0 L+ }5 ~% h
5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。
6 \9 n. Y7 b3 j0 w5 m- j+ O6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。
1 s3 Q+ k; S$ {( `/ |- b9 }7 复染，淡苏木染色1/5分钟，PBS漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。
, |- B7 |7 Z/ f# Y6 I2 Z& B8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。 3 Y5 H, X' n5 U7 j# Q1 V+ T* j% _! @
9 显微镜观察。
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chuanbaozang

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