急求油红O 染色提取法的原理步骤

richard_terry

油红O 染色提取法，先谢谢了
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chuanbaozang

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lxy07

油红O为脂溶性,它是目前被认为最优良的脂肪染色染料,在脂肪内能高度溶解,从而染色,能保存组织中的脂肪滴& E1 g5 z: z# D
; Z4 x! d: z# B( k
染色步骤： 2 N1 u3 M# y' m& Y7 i  O2 C2 Z

( m8 c. d, O) n4 ?( u* Z; U# R# Q1 先小心轻缓倒去培养夜。 9 H% X# q6 s3 ^  i
2 用PBS轻缓漂洗（不洗没问题）。6 v" L, g: R9 B/ ^6 Q* S8 N
3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。甲醛对脂肪没有什么固定，但能固定好脂肪细胞膜，不让脂肪移位。
* X2 d, S) v7 _4 d/ C5 O3 f4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。 . l/ o" _+ i, [" A' H
5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。
% ^8 X; |; p0 n5 a6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。 2 e4 Q+ c6 h: T" S; V6 h6 h
7 复染，淡苏木染色1/5分钟，PBS漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。
1 m! ?3 c, u9 @4 [, k% o8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。
) j  ^- N. N) s8 v" }( t( J$ C9 显微镜观察。 ( D; j( u5 s  H; P! ~/ W$ k