急求油红O 染色提取法的原理步骤

richard_terry

油红O 染色提取法，先谢谢了8 U; S* b: h( a+ h; {/ d1 ~
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chuanbaozang

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lxy07

油红O为脂溶性,它是目前被认为最优良的脂肪染色染料,在脂肪内能高度溶解,从而染色,能保存组织中的脂肪滴
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3 H; [9 P/ Q9 s1 n染色步骤：
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1 先小心轻缓倒去培养夜。
4 V) ~- y1 K% F% M8 K  b2 用PBS轻缓漂洗（不洗没问题）。
8 S) [" Q$ y& e+ ^, G6 L3 _3 加10%中性甲醛固定30min（实际固定时间过夜都没问题。固定液用95%酒精也可）。甲醛对脂肪没有什么固定，但能固定好脂肪细胞膜，不让脂肪移位。
+ e9 i6 H% ~8 J( `: t4 稀释油红储存液，油红：去离子水＝3:2，滤纸过滤，室温放置10min（除去一些杂质，染色结果更清晰）。 5 q2 a% s) N1 B  {" X* x! l* \
5 染色10min左右，加的体积覆盖住板底即可，如6孔加1.5ml，24孔加0.5-1ml（实际染色时间1小时都可以）。
  [$ K* @% Q( A# t6 脱色，用75%酒精/60%异丙醇漂洗，除去多余的染料（实际用其他平衡液洗也没问题，背景并不会残留多少）。
+ P( T8 S4 ?9 g: r7 复染，淡苏木染色1/5分钟，PBS漂洗（这一步不做也可，看试验需要，并且苏木素会把胞浆染红，如要显示核， hoechst33342也可以，浓度5微克/毫升染10分钟即可把核染上）。
& t! M8 t- ]; U8甘油明胶封片（封片后可长期保存）。
6 n: K( {: [* R; w9 显微镜观察。
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