有人做过intracellular staining吗？

chumin

大家好，我想问一下有没有人做过intracellular staining，是针对非cell surface marker 的一种流式细胞仪的染色方式，进行intracellular staining之后可以进行与cell surface 相似的流式细胞仪分析或分选，但是我现在想回收一下分选细胞的total RNA ，不知可否，不知intracellular staining是不是会损坏细胞内的RNA ，毕竟RNA 易降解。
# g+ H# k6 V" o* |谢谢　！

深海寂寞鱼

to chumin战友：
4 C  V/ x0 _/ p1 a5 z9 Y+ v
6 |/ Z& f3 Z4 @) q& f   标记细胞内抗原后进行细胞分选是绝对可以实现的，但是确实会对细胞内的RNA造成损失，比如说RNA的丢失，RNA的讲解。我尝试着查找文献，但是没有找到。
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   这样做在理论上是可以实现的，如果你确实需要的话，完全可以自己尝试。, }/ W  F3 n* j( S9 e2 l3 f2 p
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   据我的经验有以下几点需要注意：7 W; ]2 j0 a" ^" j; W' i

9 V  _9 r& q* n( ~+ F. g* @   1.要做胞内蛋白染色，还是需要把细胞固定后再做染色。不然的在细胞穿孔过程中会有蛋白的丢失。你的抗体能进入细胞，细胞内的蛋白当然也能跑到细胞外。
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5 Z. x- {( k) x; c( t' D+ J, \0 z   2.细胞穿孔时，尽量应用Saponin这样的可逆性穿孔试剂。8 Y1 u+ n- v5 K; w2 p

6 }  L) Y2 d0 I+ R) G2 ^" s+ H   3.无论如何，只要你能把实验的过程完成，就一定能发现你分选出的细胞之间存在RNA表达谱的差异，但是应该会是高丰度RNA的基因，低丰度估计就要难一些。如果你是广泛的筛选实验的话，当然一定会有数据。但是如果你只想知道你感兴趣的基因是否有差异，那还需要一定的运气。+ v* ^! a9 `/ b# P7 I* V5 t+ |
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   4.为了防止RNA的降解，你所有的液体和试剂还是要尽量避免RNase的污染。比如，所有的水都使用milli Q纯水，最好是出水口带有Biopak处理器的那种。所有的枪头都用DEPC处理。
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   5.还可以考虑在你配置的液体里加入RNase抑制剂或者RNA保护剂。
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    但是一切都需要你摸索。你也需要考虑成本效益原则。

chumin

真的太感谢了，讲的很明白，谢谢！