正常滑膜细胞原代培养（转）

细胞海洋

实验材料：
+ P% D$ e' C; t( ]1. 实验动物：大鼠、兔，人手术切除的关节等；6 X0 N1 {/ k( I1 R" ^* ~# e
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；
3 Y: g, l. @- |8 L7 \1 R3. 培养液：RPMI1640培养基，补加15%小牛血清；
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. P4 z( i+ s3 H% C+ v4 ?! B* j实验方法：  b6 U4 I2 r2 a
1. 将大鼠处死后，用75%酒精消毒；2 N& b1 S* L/ _, d& V% {3 M7 h
2. 用手术剪剖开其四肢皮肤与肌肉，暴露长骨两端的关节，取出关节面滑膜组织置于盛有缓冲液的培养皿中；
: D/ S' `' U) ]+ H% B6 Q3 n3. 剔除滑膜组织外层结构及周边软骨组织，用缓冲液洗2—3次；* V) a+ O4 P2 p6 W* m( N7 X' d' D8 R
4. 将滑膜组织置于盛有少量小牛血清的培养皿中，剪碎成1mm×1mm×1mm大小的植块；' ?- L* E- c; C, F; }
5. 将制备的植块接种到螺旋口培养瓶中。反转培养瓶，使植有组织块的一面朝上，加入培养液，盖好瓶盖。将培养瓶放入含5%CO2的培养箱中在37℃条件下进行培养；
. x# f; }( U6 U4 Y3 U& O' a0 K6. 培养4h后，组织块较牢黏附于瓶底时，再轻轻反转培养瓶，继续培养；
0 I* s6 {% G, ^% |  Y7. 培养3d后换培养液；