求助小鼠骨髓间充质干细胞几个问题（附图）

feifei105

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本人采用全骨髓贴壁法分离3只小鼠胫骨和股骨，用1ml注射器吸取L-DMEM 10%FBS培养基将骨髓冲洗出来，还用血管钳夹碎骨骺端，1000rpm 5分钟后至12孔板2个孔。3天后首次全量换液，至第5天仍不见贴壁变形的细胞，可能的原因？1. 我由于手法问题，将骨髓冲出时发现有些已凝结，但又尽量将血状絮状物冲碎，我园子里有人这么做也分到好些细胞，不知道这个是不是关键？2. 由于培养液的原因导致细胞贴壁不好（我用的进口血清）？  c, c: I( s# j8 z  T; z
下面图是第五天的细胞，没有贴壁变形的细胞，请教这些大的圆形细胞（不是血细胞）是什么细胞，我刚取分完时在显微镜下看也都是这种细胞（除了血细胞），只是密度很大而已，所以请各位高手帮帮忙，急死了。! t+ o; |$ R$ D4 z+ I
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还有一问题想请教：我只追求细胞纯度，想采用Percoll是用1.073g/ml吗？我看有人用1.082g/ml,哪个更好，密度梯度离心适合分离小鼠BMSC吗？用全骨髓培养的BMSC纯度如何？   C( P) R. w0 @# T; ^( Y- ]7 z

feifei105

回复 5# daviddow
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* N7 f3 l1 @5 {3 i* Z* [    2%血清可以吗？不会由于营养不够长得不好吗？

feifei105

我觉得这些大的细胞是中性粒细胞之类的，随着换液就都换走了，可为啥没有我的骨髓干呢？是不是有些凝血的原因？

feifei105

回复 2# 飞翔的十字架
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: D" |  v% y4 E+ S4 |3 a( a+ G: ?
    谢谢，我试试

feifei105

回复 6# 267318024
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! a' f8 \  {! t) I6 w% F: h& U
    非常感谢，可是我没有贴壁的细胞，是什么原因呢？血凝的原因？

feifei105

回复 11# 267318024 : |0 b5 y$ ^1 [! B
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- ~& `4 w& J& T4 s    我的老鼠用一个月，二个月的我都用过，每次取3-5只

feifei105

回复 12# liweitiky 9 R; H& F% d3 J1 I
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' [& t7 |9 z, f5 f! j我每次最少取3只，怕细胞数量太少。而且每次取之前给老鼠注射肝素，可还是有血块，是什么原因呢？请问你从处死老鼠后在酒精中泡到冲出骨髓大约多长时间，一点没有凝血吗？