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本帖最后由 细胞海洋 于 2011-2-15 23:30 编辑
2 J% _* S* H% q- h; \$ o c
* d% q2 C6 P. ^2 i6 U, G6 T: c1 e. t, B% ~# k. R5 @
注意事项
/ _1 U" h2 n- A. q丝裂霉素C在操作时要避光，避免其分解。 9 K o; n! w, ^6 G$ L& R C5 n$ W
ES细胞倾向于聚集生长，因此在复苏时，要选择好培养皿的规格 & j+ e6 S. ]% |+ P4 r
ES细胞不能长的太满，应避免使各个克隆之间接触，以免发上分化。 9 S0 j; @5 {" o4 R4 K& \) P
为避免水或血清带来的污染，对血清应进行支原体检测，配好的培养基要进行污染测试。4 m/ r1 H) r: S' v( C
环境：细胞培养需要一个无菌的环境，所以尽量是在一个独立的房间里进行。要求配有空气净化系统，能够对整个房间进行杀菌的紫外灯。 . C4 Z" S" q; r( z( f' Y( _
设备：二氧化碳培养箱、超净工作台、倒置显微镜、冰箱、水浴锅、离心机、实验桌、移液器等。
( |6 d" \$ }' y& e9 l v实验耗材：一次性的细胞培养皿或细胞培养瓶、15ml或50ml离心管、脱脂棉花、封口膜等。
+ ], ?" i: {$ o9 v试剂：干细胞对培养条件要求较高，可以根据自己的条件，尽量选用质量好的各种试剂。 2 I. {8 s7 T8 j+ m" |& Z" l
试剂的配制： 7 o. k! U) k6 a. @
DMEM培养基: 去离子水中含1.34% DMEM粉末、0.22%NaHCO3 2 t/ H2 q5 W) `5 K; E
MEF培养基：DMEM培养基中含10%FBS, 1000u/ml 青霉素, 1000g/ml 链霉素 ! g% i$ s# y+ C4 S
ES培养基: ES培养基：DMEM培养基中含15% FBS，1×106 U青霉素，1×106 g链霉素，1mM丙酮酸钠, 0.1mM 非必须氨基酸, 2mM 谷氨酰胺, 0.1mM 巯基乙醇, 1000u/ml 白血病抑制因子 5 @* _7 Q1 W. @7 S
D-Hank's： 0.8%NaCl, 0.04%KCl, 0.035%NaHCO3, 0.006%KH2PO4, 0.005325%Na2HPO4, 0.001%酚红 : e7 u: T: j. B; S
0.1%明胶: D-Hank’s溶液中含0.1%的明胶 9 z: \" Y+ m! J1 E& k
ES细胞冻存液：90% ES培养基，10% DMSO 6 X& B4 A j4 N+ R
MEF细胞冻存液：90% MEF培养基，10% DMSO
9 }: w- B5 E+ ?0 iFeeder细胞冻存液：90% FBS ，10% DMSO ; l% O, H2 M3 c3 l3 I j# ?% K
丝裂霉素C: 根据产品说明书来配制 6 F. V O; s9 ^9 U
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发表于 2010-11-13 14:42
