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本帖最后由 细胞海洋 于 2011-2-15 23:30 编辑
4 R( _& p4 f4 a( n8 Y, l
, _5 p3 b$ F7 U/ R2 o M9 M/ ?3 B6 H% M5 \, P* H. G
注意事项 : Q4 S8 X0 K& j# H
丝裂霉素C在操作时要避光，避免其分解。
# m; a' U r+ |# Z2 h5 d* AES细胞倾向于聚集生长，因此在复苏时，要选择好培养皿的规格 1 Y% r$ \% P/ |1 z( d4 G0 K/ ]
ES细胞不能长的太满，应避免使各个克隆之间接触，以免发上分化。
I+ n$ B) {, ]' A. V1 k为避免水或血清带来的污染，对血清应进行支原体检测，配好的培养基要进行污染测试。8 U6 S6 e# s. {/ E. b! i1 k: }
环境：细胞培养需要一个无菌的环境，所以尽量是在一个独立的房间里进行。要求配有空气净化系统，能够对整个房间进行杀菌的紫外灯。
' s! j: A3 ?: B) b1 q8 r设备：二氧化碳培养箱、超净工作台、倒置显微镜、冰箱、水浴锅、离心机、实验桌、移液器等。 5 W% T& @; O. _, x& o S
实验耗材：一次性的细胞培养皿或细胞培养瓶、15ml或50ml离心管、脱脂棉花、封口膜等。
O* n, S/ W# Z* \0 `试剂：干细胞对培养条件要求较高，可以根据自己的条件，尽量选用质量好的各种试剂。
$ q: m8 X5 O. X& `3 V. u0 j/ L试剂的配制：
/ b* B- V5 ]2 J3 w( l mDMEM培养基: 去离子水中含1.34% DMEM粉末、0.22%NaHCO3 , y3 A5 ?6 `! _' V" r
MEF培养基：DMEM培养基中含10%FBS, 1000u/ml 青霉素, 1000g/ml 链霉素 8 Z; z3 l3 F |7 t2 ^
ES培养基: ES培养基：DMEM培养基中含15% FBS，1×106 U青霉素，1×106 g链霉素，1mM丙酮酸钠, 0.1mM 非必须氨基酸, 2mM 谷氨酰胺, 0.1mM 巯基乙醇, 1000u/ml 白血病抑制因子 - H; a0 |- t' E& s
D-Hank's： 0.8%NaCl, 0.04%KCl, 0.035%NaHCO3, 0.006%KH2PO4, 0.005325%Na2HPO4, 0.001%酚红
6 Q- Q9 S+ D5 A5 a% Y0.1%明胶: D-Hank’s溶液中含0.1%的明胶 3 h: T- Z! F# L! C
ES细胞冻存液：90% ES培养基，10% DMSO 5 }+ ~! e( a' f1 q8 p7 ]
MEF细胞冻存液：90% MEF培养基，10% DMSO
2 L* M) s" U' C f* o/ H7 MFeeder细胞冻存液：90% FBS ，10% DMSO - {3 Q, L5 m. X' X: t0 s
丝裂霉素C: 根据产品说明书来配制 A+ S- U- x' X7 Y
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发表于 2010-11-13 14:42
