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本帖最后由 细胞海洋 于 2011-2-15 23:30 编辑 % _9 g* c& K% ^+ \
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注意事项 0 k4 g8 Y. W$ ^
丝裂霉素C在操作时要避光，避免其分解。 7 M; d8 v/ P1 }& t
ES细胞倾向于聚集生长，因此在复苏时，要选择好培养皿的规格 ( ^9 [/ h7 M+ L& ~# l
ES细胞不能长的太满，应避免使各个克隆之间接触，以免发上分化。
& z# S T% F/ V) L. y! N. e" R! n! |2 T为避免水或血清带来的污染，对血清应进行支原体检测，配好的培养基要进行污染测试。: M0 l4 w7 |0 E( l+ b2 \
环境：细胞培养需要一个无菌的环境，所以尽量是在一个独立的房间里进行。要求配有空气净化系统，能够对整个房间进行杀菌的紫外灯。
4 \" b$ _% h) w' a w/ O! A设备：二氧化碳培养箱、超净工作台、倒置显微镜、冰箱、水浴锅、离心机、实验桌、移液器等。 ' ?% }, n" U3 h
实验耗材：一次性的细胞培养皿或细胞培养瓶、15ml或50ml离心管、脱脂棉花、封口膜等。 9 ?# A4 R4 @3 h
试剂：干细胞对培养条件要求较高，可以根据自己的条件，尽量选用质量好的各种试剂。
" ~- E3 U1 s" a1 ~. v试剂的配制： 7 v D' l8 ?, c2 R& m9 X
DMEM培养基: 去离子水中含1.34% DMEM粉末、0.22%NaHCO3 8 v# J* Z! n3 u! j6 J' j
MEF培养基：DMEM培养基中含10%FBS, 1000u/ml 青霉素, 1000g/ml 链霉素 ' b$ q6 V8 E0 W+ Q6 `) A4 A3 @, _
ES培养基: ES培养基：DMEM培养基中含15% FBS，1×106 U青霉素，1×106 g链霉素，1mM丙酮酸钠, 0.1mM 非必须氨基酸, 2mM 谷氨酰胺, 0.1mM 巯基乙醇, 1000u/ml 白血病抑制因子 1 A4 K3 A. q+ Q6 q- _2 }
D-Hank's： 0.8%NaCl, 0.04%KCl, 0.035%NaHCO3, 0.006%KH2PO4, 0.005325%Na2HPO4, 0.001%酚红 ) z. e6 {9 h$ ~+ g+ I) ~
0.1%明胶: D-Hank’s溶液中含0.1%的明胶
; F* o. M% k' ?3 ~ES细胞冻存液：90% ES培养基，10% DMSO + O* ^* J+ @) n/ v& C8 i7 S
MEF细胞冻存液：90% MEF培养基，10% DMSO % X8 ~. W+ w/ [. M% B9 M
Feeder细胞冻存液：90% FBS ，10% DMSO
7 h- K0 O, `0 [% \, H丝裂霉素C: 根据产品说明书来配制
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发表于 2010-11-13 14:42
