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实验室常用染色液配方
! _/ C0 a# n* D6 ]
1 H, a( P! D0 V: F& u2 e- i3 G; x! b2 c) D: o
1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液2 I: s9 ]3 i; \
A液:美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精 毫升
3 R) C6 [* u5 k8 c4 y: [B液:氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水 100 毫升分别配制A液和B液,然后混合即成。
# D7 s9 {+ X& Y. [$ t1 a1 @2 S2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液! a6 Q7 X# h; W* L# h% r( p6 t+ U* u
A液:碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精 10.O 毫升/ j* K& b& _. ~( G% @; L6 _+ P
B液:石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水 95 毫升
) g0 O0 `; p7 x3 o6 u! D将碱性复红溶于95%酒精中,配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中,配成B液。将两者混合即成。! v2 \5 y3 Y" V
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液:结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精 25.0 毫升
% _" J5 |6 n+ ~4 o, W$ x2 fB液:草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水 100 毫升3 N+ B) u% x5 z. W0 J8 `, i
将结晶紫研细后,加入95%酒精,使之溶解,配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水,配成B液。两液混合即成。
) J" R1 I$ J, L4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘 1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水 300毫升
' _5 L2 b1 P& Q( }& H6 b先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,再将碘溶于碘化钾溶液中,溶时可稍加热,最后加足蒸馏水量。, H2 z% E5 E- M1 Z- a. Y0 N
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克 蒸馏水 100毫升8 H7 i# p+ x5 a( P: R2 D* r; I! M
6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水 100毫升先将孔雀绿研细,加少许95%酒精溶解,再加蒸馏水。
+ [+ B, p# M' O5 i0 ]3 H7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水 100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟,加入福尔马林作为防腐剂,用玻璃棉过滤。( F% [/ q% s# D% g4 g) z2 `1 ~! I
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水 100毫升1 Q. x* Q# B8 `) h# C- }4 b
9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水 95.0
% v. ]7 ?' K6 d! ^) U10、乳酸石碳酸棉蓝染色液(真菌制片,短期保存)石炭酸 10.0克 甘油 20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升 棉蓝 0.02克蒸馏水 10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化,加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,溶解即成。! ]4 o, j# }8 c. [5 S* d
11动物组织石蜡切片染色方法
# A/ M$ Q3 C3 g J6 k" H+ J7 M苏木精-伊红(HE)染色:二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min,依次进入无水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min,蒸馏水洗;入苏木精染液10 min,盐酸酒精分色4 s,自来水洗10 min;依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min,入伊红染液染色10 min;入950 mL/L及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明,中性树脂封片.* N0 ^- S. S. c" @
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# ~- y, n: [& z6 U一、常用染色液的配制
! Y* D6 e0 u) |! {⒈ 碘-碘化钾(I2-KI)溶液 能将淀粉染成蓝紫色,蛋白质染成黄色,也是植物组织化学测定的重要试剂。 3 {4 e7 I& p* g
配方:碘化钾2g ; 蒸馏水300ml ; 碘1g
; Y" e- |- E4 @& j) H先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,待全溶解后再加碘,振荡溶解后稀释至300mL,保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍,这样染色不致过深,效果更佳。
8 @. i% B, h) T' {) O1 C, g⒉ 苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ) 能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色,是著名的脂肪染色剂。
1 q( Z9 L; Q) m) ?5 }3 p% Y3 M" X9 s配方:(1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉0.1g ; 95%酒精10ml ; 过滤后再加入10ml甘油 9 I. b# _4 W# Z( D' E( K' s
(2)先将0.1g苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml。 ! ^) k: P3 S4 i4 ]6 g* N
(3)苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。
7 ^ _9 h- I2 i( n⒊ 1%醋酸洋红(aceto carmine) 酸性染料,适用于压碎涂抹制片,能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。 . }6 T5 ]% O, @: `. u6 J) s
配方:洋红1g ; 45%醋酸100ml ( g% [4 A1 o$ J( ^& U
煮沸2h左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量,然后冷却过滤,加入4%铁明矾溶液1~2滴(不能多加,否则会发生沉淀),放入棕色瓶中备用。
1 G4 A; f$ E3 @" U u⒋ 改良苯芬品红染色液(Carbol fuchsine) 核染色剂。 ' F# |& M0 o: j. O
配制步骤: 先配成三种原液,再配成染色液。 - P# o9 @' e9 `* T8 O5 r% y- O
原液A:3g碱性品红溶于100ml 70%酒精中。
3 R4 a# {/ H" ?2 Z+ E" E$ W* p0 |6 H原液B:取原液A10ml加入到90ml 5%石炭酸水溶液中。 ( _) l$ ^1 H' F5 w* y( W& V: P
原液C:取原液B 55ml,加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林(38%的甲醛)。
1 J: o9 b* G0 [" A% Y# e* f% o(原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用) $ ~, M: y: \ c8 b2 \1 [! b5 f( e
染色液:取C液10~20ml,加45%冰醋酸80~90ml,再加山梨醇1~1.8g,配成10%~20%浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著(若立即用,则着色能力差)。
8 g7 W4 C( ~: ]$ E$ P( _适用范围:适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用2~3年不变质。山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色,但效果较差。 |
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