MEF及饲养层的制备（实验记录）

CQ熊猫猫

回复 6# nculsa747 % ]* E8 \8 c. @8 _8 V
6 U4 O5 A) H& {5 f. Q

: G% g. ?' x5 C1 r/ Z- Q    谢谢你的建议，其实我不是诱导iPS细胞，我是买的iPS细胞株，向心肌细胞分化！& ~2 P" t( h9 C1 i. ^( O* U
  之前我师兄真的没用丝裂霉素C处理，就直接把iPS细胞种在成纤维上面，传代后，差贴下来的成纤维又会长出iPS团来。但是我还是想处理下成纤维细胞，这样iPS细胞也许会长得快些。+ H; _, z( w1 }1 r
  制作成纤维的时候，我是用的10cm的大培养皿，冻之前改培养在6孔板的，方便以后复苏iPS细胞，因为iPS细胞不能大规模的培养，所以才用的6孔板
4 ~$ d: X7 v2 ~+ S+ `7 s  请问国产的丝裂霉素C那个公司的比较好，有效期比较长，呵呵！谢谢了

nculsa747

回复 4# treestem
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! z! i6 n+ J/ ?. Z我们通常前一天复苏feeder，第二天用它来接种ESC。标准是：密度要适中，过密细胞不易贴壁，过疏细胞易分化。feeder的状态好坏，讲不太清楚，凭个人经验。mef 与feeder形态应该没有多大差别，只是后者不能够分裂而矣。

nculsa747

回复 5# CQ熊猫猫 % N! C9 L# ]6 _8 Z# G. w
7 F3 S) c  `/ G2 o* Y0 w- s8 y8 T+ F
首先，你要搞清楚一个问题，iPS和ES是要在Feeder上才能很好的生长的（悬浮培养暂且不说）。为什么用Feeder呢，因为它不能够分裂，但可以分泌一些生长因子之类的东西供iPS\ES生长。你没有用MMC处理MEF，就用其培养iPS，你的iPS如果能长起来就怪了！8 n3 T3 w# _3 Q8 d- K
可以在复苏后用MMC处理MEF，冻存前处理MEF，复苏时会有一部分死亡，可以适当增加铺板密度。我们通常一次处理很多MEF成Feeder，然后计数，冻存，用时复苏即可。如果你想复苏后再处理，当然也是可以的。
$ O2 d4 z  G$ ^- w) t4 j你经费有限，还用六孔板养MEF，看来你们还是有钱。一般养在100mm 培养皿中就行了（corning的就很好）。100mm dish加3－4mlMMC即可。六孔板，每孔加500微升到1毫升应该是够了。) u) Y& W3 }- ?( `
祝你好运！

CQ熊猫猫

回复 1# nculsa747 . S# S& O" \1 Z0 n9 ^: _

5 s, r7 ^3 w8 U- f
7 y8 a$ {& ~8 E& M       楼主你好，我想请问下关于丝裂霉素C处理成纤维细胞问题。
5 f6 P/ O/ V5 U( Z, N/ @! \# D    我现在的成纤维没用丝裂霉素C处理，成纤维长得飞快，而iPS细胞长得很慢，估计是营养跟不上还是其他的啦？因为师兄买的丝裂霉素C是国产的，有效期只有3个月吧，已经过期了，所以才没用的。
% P! p( C) v% c* U" a    所以我想问一下，如果我用丝裂霉素C处理成纤维的话，可以复苏后再处理吗？因为冻之前处理的话，我害怕复苏效果不好。但是如果复苏后处理，丝裂霉素C有效期又要必须长才行，纠结啊......, ~- j! m( n  o! r/ b
      还有就是，我用六孔板养的细胞，一次加多少丝裂霉素C工作液啊？: F* r2 i( H5 w0 k! i
    科研计费不多，所以想丝裂霉素C这些试剂都只能买国产的，惨啊！！！
$ K8 M( e; F5 Q, E7 M    非常感谢

treestem

回复 3# 懵懂干细胞 [/
( ]0 a; M+ f5 Q怎样的feeder是好的?楼主一般用什么方法来判定呢？处理后feeder在形态上有明显变化吗？

懵懂干细胞

回复 2# nculsa747 2 [( X) n; n( S6 j
加为精华你向海洋大哥申请！呵呵！我给你加分！！谢谢分享！！！

nculsa747

请求加精！！！