大家帮手看看，细胞是怎么啦？？哭!

霄子

7天前做的原代骨髓间充质干细胞: l+ C- G, K/ @* V) @6 {
10.28做的原代骨髓干，现在传了一代% ^" ]5 e* n) a- m
11.4做的原代骨髓干，现在传了一代
. @+ y& l' X1 Z3 F% e上周做的原代成肌细胞
+ t9 R0 h9 p, C- t; }( }$ v$ [11.4做的原代成肌细胞，现在是第二代。/ w9 @5 y* B# P- X% D  U1 j+ I& ?
PS：我用的是低糖DMEM，15%的胎牛血清，三天换液一次。
1 D8 [( I, H8 m: k. j1 m" n大家帮看看。为什么细胞都这样啊？是什么原因呢？还能要吗？

霄子

我的步骤是：200克SD大鼠1只，断颈处死，酒精浸泡5分钟，剪开腿部皮肤，取股骨和胫骨转移至超净台内，剔除筋肉，pbs清洗两次，剪开骨髓两端，用2ml注射器抽取培养液冲出细胞，然后用注射器打散，转移至15ml离心管，1000转/min,离心5分钟，再用培养液重悬，吸管吹打后分装入两个25ml培养皿内。放入37℃，5%CO2的培养箱，24h后首次换液，以后每3天换一次。$ i+ W' A. C6 R4 ~" X! I
请问一下，我以上的步骤有问题么？我发现血细胞有很多，所以不确定到底是用什么样的密度去接种？各位大虾有没有经验性的呢？或者是我24h换液的时候还有干细胞没贴壁被我换掉了？？另外我是没使用抗凝的，会不会有影响？