大家帮手看看，细胞是怎么啦？？哭!

霄子

7天前做的原代骨髓间充质干细胞- G. a0 b% k4 X8 C/ g
10.28做的原代骨髓干，现在传了一代4 E9 M& \6 r+ J2 Q: f, Z) v
11.4做的原代骨髓干，现在传了一代
2 r0 ~! P) y; ~4 k上周做的原代成肌细胞2 T- D, l+ o! U( g* c6 R
11.4做的原代成肌细胞，现在是第二代。! B0 q: r$ x8 J" @, K( \
PS：我用的是低糖DMEM，15%的胎牛血清，三天换液一次。- f, h1 Z* S: S7 n" B, ?" D- h* A) H- l
大家帮看看。为什么细胞都这样啊？是什么原因呢？还能要吗？

黑眼豆豆

最好能大概说说你的操作步骤，单纯从图片上看，你的原代干细胞形态就不怎么好,7天了细胞量有点少。

andyz0922

接种的细胞太少  传代时间 别超过一周  那些好像都不是MSC  消化时候倒是能看到这样的细胞  就是说你的细胞贴壁不是很好  提高下血清试试

267318024

看了一下你的细胞，首先平常的倒置显微镜应该不会照出这种照片的，你调整一下你的镜头，是不是把镜头选错了，再者，就图片来看，细胞数量确实很少，如果几个视野都是这样的话，得重新再取了，还有，细胞没有明显的贴壁现象，如果可以把你的方法也介绍一下，我们可以从中找到更好的原因，参考一下！

xiaodiao123

这应该是用荧光倒置显微镜拍的照片吧

illidancui

是不是吧相差功能取消掉就看着习惯了

liujucool

原代长7天还这么稀少  细胞接种肯定少了 6 K. P- V3 `& q7 L
最近做的原代也出现这些情况  以前做的都挺好的  不知道什么原因  那不成是它们也冬眠了. ^1 X+ a0 N  c
等待楼主具体说下步骤  

清影VS猪猪

接种密度太少

霄子

我的步骤是：200克SD大鼠1只，断颈处死，酒精浸泡5分钟，剪开腿部皮肤，取股骨和胫骨转移至超净台内，剔除筋肉，pbs清洗两次，剪开骨髓两端，用2ml注射器抽取培养液冲出细胞，然后用注射器打散，转移至15ml离心管，1000转/min,离心5分钟，再用培养液重悬，吸管吹打后分装入两个25ml培养皿内。放入37℃，5%CO2的培养箱，24h后首次换液，以后每3天换一次。
( C3 a& e! Z# x* w1 o请问一下，我以上的步骤有问题么？我发现血细胞有很多，所以不确定到底是用什么样的密度去接种？各位大虾有没有经验性的呢？或者是我24h换液的时候还有干细胞没贴壁被我换掉了？？另外我是没使用抗凝的，会不会有影响？

zhenhuale

首先你的BM-MSC幼稚程度还可以，说明没有老化，但是细胞这么少说明原代接种密度太低，我的经验是接种密度4000/平方厘米, $ m* h) d  V* g+ S- T" p+ p
其次首次换液在24h，并且首次办量换液