小鼠骨髓间充质干细胞培养纯度问题

feiyang

向大家请教！我养的小鼠骨髓间充质干细胞，原代长的很好，传P1长出来的细胞，看到很多大的成纤维细胞，传P2代仍有这种情况，细胞纯度很低。请问高手，我应该从哪些方面做，提高细胞纯度？谢谢大家，细胞长不好，我又急又难过。

feiyang

谢谢大家的帮助！7 w0 D& c3 r; V' d
yangjie0329 ：看形态像成纤维细胞。我分离小鼠股骨和胫骨时，基本都把软组织去除了，但是不是百分之百的去除，骨头上还留有一点肉，骨髓冲出来后，通过70um过滤器的，这样软组织是不是被滤掉了？; \  y% L! K2 H% y- s
小熊不杀生，regene： 我的实验要求MSC纯度达到至少90％。我以前胰酶消化时间7－8分钟（因为很多消化不下来），现在消化时间控制在2分钟，然后用枪冲洗培养瓶把细胞都冲下来。我以前用LDMEM＋20％FBS，现在把FBS浓度降到15％。不知我做的对不对？$ {  O/ @. x/ y! p
还有一个问题请教大家，P0细胞消化下来的细胞叫P0还是P1，如果是P1的话，那么P2代细胞长满消化下来的细胞就是P3了对吗？我P0代细胞养在75cm2培养瓶的，传P1时1:1传，传P2时1:2传。细胞接种密度下降后，明显影响细胞长势。我不知道我做的对不对，请大家帮帮我吧！

feiyang

liujucool ：谢谢你，可是什么叫“传代时差速贴壁来纯化细胞”，能具体指点我一下吗？

feiyang

什么叫“传代时差速贴壁来纯化细胞”，能具体指点我一下吗？