小鼠骨髓间充质干细胞培养纯度问题

feiyang

向大家请教！我养的小鼠骨髓间充质干细胞，原代长的很好，传P1长出来的细胞，看到很多大的成纤维细胞，传P2代仍有这种情况，细胞纯度很低。请问高手，我应该从哪些方面做，提高细胞纯度？谢谢大家，细胞长不好，我又急又难过。

regene

小鼠骨髓间充质干细胞本身就是一个复杂的群体细胞，并不是某一单一细胞；传代培养可使提高骨髓间充质干细胞的单一性，主要根据不同细胞贴壁能力的差异，通过控制胰酶消化时间来分离细胞。

yangjie0329

你确定是成纤维细胞吗？软组织去除的干净吗，一般不会出现吧，我们实验室好几个人都在养，也没出现成纤维细胞

小熊不杀生

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6 Q- A. t1 P( }! T! Y( @$ L, W* o3 k2 E* V
不知道你培养bmsc做什么用，如果对纯度要求高的话，可以做流式鉴定，如果只是怀疑因为其他细胞影响了bmsc的形态或长势，你可以通过胰酶消化的时间，或者定向诱导分化，具有分化能力的即为bmsc，其实bmsc本身形态就有多样性，原代培养的时候过了平台期就好了，再者就是提高接种密度

feiyang

谢谢大家的帮助！% Y( P% S% B" O1 K, T$ j0 ]9 U% J7 K
yangjie0329 ：看形态像成纤维细胞。我分离小鼠股骨和胫骨时，基本都把软组织去除了，但是不是百分之百的去除，骨头上还留有一点肉，骨髓冲出来后，通过70um过滤器的，这样软组织是不是被滤掉了？! E: E: U& D3 u' |1 G8 E
小熊不杀生，regene： 我的实验要求MSC纯度达到至少90％。我以前胰酶消化时间7－8分钟（因为很多消化不下来），现在消化时间控制在2分钟，然后用枪冲洗培养瓶把细胞都冲下来。我以前用LDMEM＋20％FBS，现在把FBS浓度降到15％。不知我做的对不对？
5 s% i( _9 x! ]* R+ @还有一个问题请教大家，P0细胞消化下来的细胞叫P0还是P1，如果是P1的话，那么P2代细胞长满消化下来的细胞就是P3了对吗？我P0代细胞养在75cm2培养瓶的，传P1时1:1传，传P2时1:2传。细胞接种密度下降后，明显影响细胞长势。我不知道我做的对不对，请大家帮帮我吧！

liujucool

可以通过传代时差速贴壁来纯化细胞；取原代尽量把肌肉弄干净；细胞本身就是多形态的，传代后细胞变大，形态多样
2 C- M: |, R% V9 ^哪位大侠直达BMSC做一次鉴定多少MONEY

liujucool

还有FBS的浓度也高 越有利于成纤维细胞生长  建议用10%FBS；实在还不行就加点抑制成纤维细胞生长的药物，有的还能起到标记细胞的作用，如BRDU

feiyang

liujucool ：谢谢你，可是什么叫“传代时差速贴壁来纯化细胞”，能具体指点我一下吗？

bin

可能你的“成纤维细胞”也仅仅是像它罢了，MSC就有一种形态是成纤维状的。

lchanlon

来了